1楼：匿名用户
琼脂扩散试验（gel diffusion test）
可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂凝胶内扩散，二者相遇，在比例合适处形成白色沉淀。基本类型有单向扩散和双向扩散两种。
（一）双向琼脂扩散试验（double immunodiffusion test）
抗原和抗体加到琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如两者相对应，浓度比例合适，则经一定时间后，在抗原、抗体孔之间出现清晰致密的白色沉淀线。每一抗原与其相对应抗体只能形成一条沉淀线，若同时含有若干对抗原抗体系统，因其扩散速度的不同，可在琼脂中出现多条沉淀线。且根据沉淀线融合情况，还可鉴定两种抗原是完全相同还是部分相同。
所以，可用此法来分析和鉴定标本中多种抗原或抗体成份，并用以测定抗原或抗体的效价。
【材料】羊抗人全血清，小牛血清，正常人混合血清，精制琼脂粉，生理盐水、载玻片，打孔器（直径3mm）、湿盒、吸管等。
【方法】
1、用生理盐水配制1.0～1.5%琼脂，隔水煮沸使溶化，用吸管吸取3.5ml趁热浇于载玻片上，制成琼脂板。
2、待琼脂凝固后，按右图用打 孔器打孔，并用针头挑去孔中琼脂 （孔距为5mm）。
3、在①孔中加正常人混合血清，在②孔中加小牛血清，③孔中加羊抗人全血清，注意不要溢出。
4、将加好样品的琼脂板置于湿盒内，于37℃温箱内放置24小时后观察结果。
【结果】
观察孔间沉淀线的数目与特征，一般可注意到以下几种现象：
1、抗原与抗体孔间形成一条沉淀线，说明只有一种抗原与相对应的抗体特异性结合，如出现数条沉淀线，说明有几组不同的抗原和相对应抗体相结合。
2、根据抗原的成份可有以下三种现象：（1）若二孔中的抗原相同，与相应抗体形成的沉淀线融合成弧形；（2）若二孔中抗原不同，当抗血清中分别含有与抗原相应的抗体时，则形成的沉淀线相交叉；（3）若两孔中抗原部分相同，抗血清中有各相应的抗体，形成的沉淀线相切。
3、相应抗原抗体所形成的沉淀线，如二者浓度相当，沉淀线在孔**，二者浓度不当时，则沉淀线偏向浓度低的一侧
（二）单向琼脂扩散试验（single immunodiffusion test）—人血清中igg、iga、igm的测定。
单向琼脂扩散试验是一种定量试验，将抗体混合于琼脂内，倾注于玻片或平皿上，凝固后在琼脂上打孔，再将抗原标本加入孔内，经过一定的时间，在孔的周围出现抗原抗体复合物形成的沉淀环，环的大小与抗原含量和扩散时间相关。用不同浓度的抗原制成标准曲线，则未知标本中的抗原含量即可从准标曲线中求出。本试验主要用于检查血清中各种免疫球蛋白和补体成份的含量。
材料】igg、iga、igm免疫板、参考血清、待检血清、微量加样器（10微升）、量尺、纱布、生理盐水、带盖方盘。
【方法】
1、免疫琼脂板制备：将1.5%琼脂（用ph8.
2、0.05m的巴比妥缓冲液配成），加热溶化，待琼脂冷至56℃加入适量抗血清（抗血清最终稀释度取决于抗血清所标化的稀释度），混匀，制成厚1.5mm的琼脂板，待琼脂凝固后打孔，孔径为3mm，孔距1～1.
2cm。
2、稀释参考血清及待检血清：参考血清用0.5ml蒸馏水溶解后使用，参考血清、待检血清稀释按要求进行。
3、加样：将上述稀释参考血清分别滴入相应的抗体免疫板的一排孔内，其余孔滴加待检的稀释血清，每个检样加两个孔，每孔滴加10微升。
4、扩散：将免疫板置水平湿盘内，放进37℃温箱，igg免疫板扩散24小时，iga、igm板48小时后取出置黑色背景前观察结果，（如果沉淀环不清晰，也可用1%鞣酸液浸泡免疫板半小时后观察），必要时可以染色后观察。
5、绘制标准曲线及血清标本中igg、iga、igm定量测定：测量沉淀环直径。沉淀环直径的大小除与抗原量相关，还与分子量和扩散时间有关。
这种沉淀环直径与抗原含量的关系不是直线相关，而是对数关系，这种关系有两种计算方法：
（1）mancini曲线－适用于大分子抗原和长时间扩散（＞48小时）的结果处理。使用方格计算纸划线，沉淀环直径的平方与抗原浓度呈线性关系。公式表示：
c／d2 ＝k（c＝抗原浓度，d＝沉淀环直径，k＝常数）。
（2）fehey曲线－适用于小分子抗原和较短时间（24小时）扩散的结果处理。使用半对数纸划线，浓度的对数与沉淀环之间呈线性关系。公式表示：
logc／d＝k（c＝抗原浓度，d＝沉淀环直径，k＝常数）。
【结果】免疫球蛋白的含量用mg/ml表示，不同批号的参考血清其免疫球蛋白含量不一。
请教做琼脂扩散实验的方法
2楼：匿名用户
琼脂扩散试验（gel diffusion test） 可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂凝胶内扩散，二者相遇，在比例合适处形成白色沉淀。基本类型有单向扩散和双向扩散两种。 （一）双向琼脂扩散试验（double immunodiffusion test） 抗原和抗体加到琼脂板上
琼脂扩散试验的检查过程
3楼：砿鄿
双向琼脂扩散试验是在含有电解质的半固体琼脂板上，将可溶性抗原和抗体分别加入具有一定距离和孔径的小孔内，使其在一定条件下相互扩散，两者在比例合适处相遇，形成白色沉淀线(带)。当存在多种抗原抗体系统时可出现多条沉淀线，然后可根据沉淀线的数目、位置、形状对抗原抗体系统进行分析。单向琼脂扩散又称单向环状免疫扩散，是一种定量测定抗原的方法。
常用来检测标本中各种免疫球蛋白及血清中各种补体成分的含量。灵敏度高，可对免疫性疾病作辅助诊断。
琼脂扩散试验的介绍
4楼：奔放神
琼脂扩散试验为可溶性抗原与相应抗体在含有电解质的半固体凝胶(琼脂或琼脂糖)中进行的一种沉淀试验。琼脂在实验中只起网架作用，含水量为99%，可溶性抗原与抗体在其间可以自由扩散，若抗原与抗体相对应，比例合适，在相遇处可形成白色沉淀线，是为阳性反应。沉淀线在凝胶中可长时间保持固定位置并可经染色后干燥保存。
沉淀线(带)对抗原与抗体具有特异的不可透性，而非特异者则否。所以一个沉淀线(带)即代表一种抗原与抗体的沉淀物，因而本试验可对溶液中不同抗原抗体系统进行分析研究。
琼脂扩散法是怎样的？
5楼：漫阅科技
琼脂扩散法又称圆筒平板法。用于测定抗生素效价的生物学定量方法之一。标准的方法是以20毫升的琼胶培养基放入陪替氏培养皿内做成平面，上面加上预先培养的试验标准菌种，例如掺入了葡萄球菌的琼胶4毫升，而使之凝固，上面再放上一个外径8毫米的不锈钢圆筒，筒内倒满青霉素稀释液之后，在35～37℃培养12～16小时。
由于圆筒周围产生浓度梯度，葡萄球菌的繁殖被阻止于有效浓度范围之内而形成圆形的透明带。其直径d与青霉素浓度c之间的关系如下式所示：
d=klog10c+a（k、a为常数）
与标准青霉素液相比较，可求得青霉素浓度。测定链霉素时用枯草菌，氯霉素用大肠菌，四环素用八连球菌作繁殖试验。此外还有用圆形滤纸代替圆筒，使被检液渗入的滤纸法。
常用琼脂扩散试验的琼脂浓度为多少？
6楼：廖佳一
1．材料和试剂
（1）ph8.6，0.1m巴比妥——巴比妥钠缓冲液
巴比妥钠 10.3 g
巴比妥 1.84 g
硫柳汞 100 mg（防腐剂）
蒸馏水加热溶解并定容至500ml
（2）1%预复琼脂（或琼脂糖）
1g琼脂（或琼脂糖）加蒸馏水100ml溶化即可。
（3）1%琼脂糖凝胶
1g琼脂糖加50ml蒸馏水置水溶中煮沸溶解或用与波炉加热溶解（注意不要溢出且注意加入蒸发的水），然后再加入50ml上述巴比妥缓冲液混匀，置4℃保存备用。
（4）抗原及相应免疫血清。
单向琼脂扩散试验 是一种常用的定量检测抗原的方法。将适量稀释后的抗体与等量琼脂混匀，浇注成板，凝固后，在板上打孔，孔径3mm，孔间距10mm，孔中加入抗原，每孔10μl，放置湿盒中，37℃温箱，抗原就会向孔的四周扩散，边扩散边与琼脂中的抗体结合。24h－48h后观察结果，在两者比例适当处形成白色沉淀环。
沉淀环的直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则从曲线中可求出标本中抗原的含量。本试验主要用于检测标本中各种免疫球蛋白和血清中各种补体成分的含量，敏感性很高。
双向琼脂扩散试验 测定时将加热溶化的琼脂或琼脂糖浇至玻片上，等琼脂凝固后，打多个小孔，将抗原和抗体分别加入小孔内，使抗原和抗体在琼脂板上相互扩散。当二个扩散圈相遇，如抗原和抗体呈特异性的结合且比例适当时，将会形成抗原抗体复合物的沉淀，该沉淀可在琼脂中呈现一条不透明的白色沉淀线。如果抗原与抗体无关，就不会出现沉淀线，因此可以通过该试验，用特异性抗体鉴定抗原，或反之用已知抗原鉴定抗体。
另外沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原，抗体的特异性和浓度，而且与其分子的大小及扩散速度有关，当抗原体存在多种成分时，将呈现多条沉淀线以至交叉反应线，因此可用来检查抗原和免疫血清的特异性、纯度或浓度比较抗原之间的异同点，因而应用范围较广。
琼脂扩散试验的注意事项
7楼：一只笔
不合宜人群：无特殊要求。 检查时的禁忌：
禁忌暴饮暴食，和剧烈运动，适宜在早晨空腹检测。 检查时要求：试验前应做预试验，确定抗体的稀释度。
加样时不要将琼脂划破，以免影响沉淀线的形成。加样时不同浓度抗体和抗原不要混淆，影响试验结果。
琼脂扩散试验的类型有哪些,双向琼脂扩散实验主要用于哪些方面
1楼 匿名用户 扩散和双向扩散两种。 一 双向琼脂扩散试验 double immunodiffusion test 抗原和抗体加到琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如两者相对应，浓度比例合适，则经一定时间后，在抗原 抗体孔之间出现清晰致密的白色沉淀线。每一抗原与其相对应抗体只能形成一条沉淀线...
琼脂扩散试验的临床意义,简述单项琼脂扩散的原理及意义
1楼 北條 勁a撓 异常结果 增高，胎儿宫内感染，新生儿torch症群，慢性或亚急 染，疟疾，传染性单核细胞增多症，支原体肺炎，肝病，结缔组织疾病，巨球蛋白血症，无症状性单克隆igm病等。降低，遗传性或获得性抗体缺乏症，混合性免疫缺陷综合症，选择性igm缺乏症，蛋白丢失性肠病，烧伤，抗ig抗体综合症...