1楼：匿名用户
质粒dna的制备 【实验目的】
1.了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用；
2.掌握质粒dna分离和纯化的原理；
3.学习碱裂解法和煮沸法分离质粒dna的方法。
【实验原理】
质粒是细菌内的共生型遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞特定的表型。质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量尽可能减少，以便于基因工程操作。
大多质粒载体带有一些多用途的辅助序列，这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、产生用于序列测定的单链dna、体外转录外源dna 序列、鉴定片段的插入方向、外源基因的大量表达等。一个理想的克隆载体大致应有下列一些特性：（1）分子量小、多拷贝、松驰控制型；（2）具有多种常用的限制性内切酶的单个酶切位点；（3）能插入较大的外源dna 片段；（4）具有容易操作的检测表型。
常用的质粒载体大小一般在1kb 至10kb 之间，如pbr322、puc 系列、pgem 系列和pbluescript（简称pbs）等。经过改造的基因工程质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的重要媒介，这种基因的运载工具在基因工程中具有极广泛的用途，而质粒的分离与提取则是基因工程最常用、最基本的实验技术。
一般分离质粒dna的方法都包括3个步骤：①培养细菌，使质粒dna大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒dna。分离制备质粒dna的方法很多，其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、sds法和羟基磷灰石层析法等。
在实际操作中可以根据宿主菌株的类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒dna的用途选择不同的方法。本实验介绍最常用的碱裂解法和煮沸法提取质粒dna。
维他命ａ．ｂ．ｃ．ｄ．ｅ和维生素ａ．ｂ．ｃ．ｄ．ｅ有什么区别，对人体各有什么用？
2楼：可爱狗狗
1）维生素a 不饱和的一元醇类,属脂溶性维生素。由于人体或哺乳动物缺乏维生素a时易出现干眼病,故又称为抗干眼醇。 已知维生素a有 a1和 a2两种，a1存在于动物肝脏、血液和眼球的视网膜中，又称为视黄醇,天然维生素a主要以此形式存在。
a2主要存在于淡水鱼的肝脏中。维生素a1是一种脂溶性淡黄色片状结晶，熔点64℃，维生素a2熔点17～19℃，通常为金黄色油状物。维生素a是含有β-白芷酮环的多烯醇。
维生素a2的化学结构与a1的区别只是在β-白芷酮环的3,4位上多一个双键。维生素a分子中有不饱和键，化学性质活泼,在空气中易被氧化,或受紫外线照射而破坏,失去生理作用，故维生素 a的制剂应装在棕色瓶内避光保存。不论是a1或a2，都能与三氯化锑作用，呈现深蓝色，这种性质可作为定量测定维生素a的依据。
许多植物如胡萝卜、番茄、绿叶蔬菜、玉米含类胡萝卜素物质，如α、β、γ-胡萝卜素、隐黄质、叶黄素等。其中有些类胡萝卜素具有与维生素a1相同的环结构，在体内可转变为维生素a，故称为维生素a原,β-胡萝卜素含有两个维生素a1的环结构，转换率最高。一分子β胡萝卜素，加两分子水可生成两分子维生素a1。
在动物体内，这种加水氧化过程由 β胡萝卡素-15，15′-加氧酶催化，主要在动物小肠粘膜内进行。食物中，或由β-胡萝卜素裂解生成的维生素a在小肠粘膜细胞内与脂肪酸结合成酯,然后掺入乳糜微粒,通过淋巴吸收进入体内。动物的肝脏为储存维生素 a的主要场所。
当机体需要时，再释放入血。在血液中，视黄醇(r)与视黄醇结合蛋白(rbp)以及血浆前清蛋白(pa)结合，生成r-rbp-pa复合物而转运至各组织。 维生素a的主要作用是:
①维持一切上皮组织健全所必需。缺乏时，上皮组织干燥、增生、过度角化，抵抗微生物感染的能力降低。例如泪腺上皮分泌停止，能使角膜、结膜干燥，发炎，甚至软化穿孔。
皮脂腺及汗腺角化时，**干燥，容易发生毛囊丘疹和毛发脱落。②促进生长、发育及繁殖。缺乏维生素a时,儿童生长发育不良，骨骼成长不良，生殖功能减退。
③构成视觉细胞内感光物质的成分。维生素 a在脱氢酶作用下可氧化生成视黄醛，视黄醛与光感受器(视杆细胞和视锥细胞)中不同的视蛋白结合产生各种不同吸收光谱的视色素，如视紫红质、视紫质等。视色素为感光物质，它们吸收光子会引起一连串的物理化学变化，产生感受器电位。
这种感受器电位通过视网膜上各种神经细胞转变为脉冲形式的神经冲动，传至大脑，产生视觉。现已知道，视网膜中的视紫红质可以在感光过程中不断地分解与再生并且构成动态平衡。视色素在暗处时，其中的视黄醛以11-顺构型存在，称为11-顺视黄醛，而在感光后则迅速转变为全反型视黄醛。
伴随构型的改变，视色素出现褪色反应，并分解为反式视黄醛和视蛋白。反式视黄醛经微光照射,又可重新转变为11-顺视黄醛，并与视蛋白结合形成视紫红质，从而保证视杆细胞能持续感光，出现暗视觉，也就是在微弱光线下可以看到事物的轮廓和形状。但是，组成视紫红质的视蛋白和视黄醛经常不断地进行分解代谢,因此需要不断补充蛋白质和维生素a。
倘若维生素a**不足，杆状细胞中视紫质合成减少,会导致暗视觉障碍——夜盲症。 每天的需求量： 妇女需要0.
8毫克。即80克鳗鱼65克鸡肝，75克胡萝卜，125克皱叶甘蓝或200克金枪鱼。 功效：
增强免疫系统，帮助细胞再生，保护细胞免受能够引起多种疾病的自由基的侵害。它能使呼吸道、口腔、胃和肠道等器官的黏膜不受损害，维生素a还可明目。 ***：
每天摄入3毫克维生素a，就有导致骨质疏松的危险。长期每天摄入33毫克维生素a会使食欲不振、**干燥、头发脱落、骨骼和关节疼痛，甚至引起流产。 （2）维生素b b族维生素富含于动物肝脏、瘦肉、禽蛋、牛奶、豆制品、谷物、胡萝卜、鱼、蔬菜等食物中。
它是一类水溶性维生素，大部分是人体内的辅酶，主要有以下几种。 ①维生素b1 b1是最早被人们提纯的维生素，1896年荷兰王国科学家伊克曼首先发现，1910年为波兰化学家丰克从米糠中提取和提纯。它是白色粉末，易溶于水，遇碱易分解。
它的生理功能是能增进食欲，维持神经正常活动等，缺少它会得脚气病、神经性皮炎等。**每天需摄入2mg。它广泛存在于米糠、蛋黄、牛奶、番茄等食物中，目前已能由人工合成。
因其分子中含有硫及氨基，故称为硫胺素，又称抗脚气病维生素。它主要存在于种子外皮及胚芽中，米糠、麦麸、黄豆、酵母、瘦肉等食物中含量最丰富，此外，白菜、芹菜及中药防风、车前子也富有维生素b1。提取到的维生素b1盐酸盐为单斜片晶；维生素b1硝酸盐则为无色三斜晶体，无吸湿性。
维生素b1易溶于水，在食物清洗过程中可随水大量流失，经加热后菜中b1主要存在于汤中。如菜类加工过细、烹调不当或制成罐头食品，维生素会大量丢失或破坏。维生素b1在碱性溶液中加热极易被破坏，而在酸性溶液中则对热稳定。
氧化剂及还原剂也可使其失去作用。维生素b1经氧化后转变为脱氢硫胺素（又称硫色素），后者在紫外光下可呈现蓝色荧光，利用这一特性可对维生素b1进行检测及定量。 维生素b1在体内转变成硫胺素焦磷酸（又称辅羧化酶），参与糖在体内的代谢。
因此维生素b1缺乏时，糖在组织内的氧化受到影响。它还有抑制胆碱酯酶活性的作用，缺乏维生素b1时此酶活性过高，乙酰胆碱（神经递质之一）大量破坏使神经传导受到影响，可造成胃肠蠕动缓慢，消化道分泌减少，食欲不振、消化不良等障碍。 ②维生素b2 b2又名核黄素。
1879年大不列颠及北爱尔兰联合王国化学家布鲁斯首先从乳清中发现，1933年美利坚合众国化学家哥尔倍格从牛奶中提取，1935年德国化学家柯恩合成了它。维生素b2是橙黄色针状晶体，味微苦，水溶液有黄绿色荧光，在碱性或光照条件下极易分解。熬粥不放碱就是这个道理。
人体缺少它易患口腔炎、皮炎、微血管增生症等。成年人每天应摄入2～4mg，它大量存在于谷物、蔬菜、牛乳和鱼等食品中。 ③维生素b5 b5又称泛酸。
抗应激、抗寒冷、抗感染、防止某些抗生素的毒性，消除术后腹胀。 ④维生素b6 它有抑制呕吐、促进发育等功能，缺少它会引起呕吐、抽筋等症状。包括三种物质，即吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺。
吡哆醇在体内转变成吡哆醛，吡哆醛与吡哆胺可相互转变。酵母、肝、瘦肉及谷物、卷心菜等食物中均含有丰富的维生素b6。维生素b6易溶于水和酒精,稍溶于脂肪溶剂；遇光和碱易被破坏，不耐高温。
维生素b6在体内与磷酸结合成为磷酸吡哆醛或磷酸吡哆胺。它们是许多种有关氨基酸代谢酶的辅酶，故对氨基酸代谢十分重要。 每天的需求量：
人体每日需要量约 1.5～2毫克。食物中含有丰富的维生素b6，且肠道细菌也能合成，所以人类很少发生维生素b6缺乏症。
***：日服100毫克左右就会对大脑和神经造成伤害。过量摄入还可能导致所谓的神经病，即一种感觉迟钝的神经性疾病。
最坏的情况是导致**失去知觉。 ⑤维生素b12 维生素b12，即抗恶性贫血维生素,又称钴胺素,含有金属元素钴，是维生素中唯一含有金属元素的，抗脂肪肝，促进维生素a在肝中的贮存；促进细胞发育成熟和机体代谢。它与其他b族维生素不同，一般植物中含量极少，而仅由某些细菌及土壤中的细菌生成。
肝、瘦肉、鱼、牛奶及鸡蛋是人类获得维生素b12的**。商品可从制造某些抗生素的副产品或特殊的发酵制得。维生素b12是粉红色结晶，水溶液在弱酸中相当稳定，强酸、强碱下极易分解，日光、氧化剂及还原剂均易破坏维生素b12。
它经胃肠道吸收时，须先与胃幽门部分泌的一种糖蛋白（亦称内因子）结合，才能被吸收。因缺乏“内因子”而导致的b12缺乏，**应采用注射剂。脱氧腺苷钴胺素是维生素b12在体内主要存在形式。
它是一些催化相邻两碳原子上氢原子、烷基、羰基或氨基相互交换的酶的辅酶。体内另一种辅酶形式为甲基钴胺素，它参与甲基的转运，和叶酸的作用常互相关联，它可以增加叶酸的利用率来影响核酸与蛋白质生物合成，从而促进红细胞的发育和成熟。 缺乏维生素b12时会发生恶性贫血，人体对b12的需要量极少，人体每天约需12μg（1／1000mg），人在一般情况下不会缺少。
⑥维生素b13 （乳酸清）。 ⑦维生素b15 （潘氨酸）。主要用于抗脂肪肝，提高组织的氧气代谢率。
有时用来**冠心病和慢性酒精中毒。 除此之外，胆碱和肌醇也往往归于必需维生素类，它们两是维生素b族的成员。
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