1楼：d证
把你所要tag（比如his) 的编码序列和你所要的蛋白序列放到同一个阅读框，克隆到表达质粒。至于tag是放在n端还是c端，取决于你蛋白的性质。
2. 转染ecoli。表达蛋白
3. 将抗tag的抗体结合到专门的磁珠表面4. 粉碎ecoli，离心后取上清.
和结合有抗体的磁珠一起孵育。在通过磁场。最后得到的磁珠，破坏抗原抗体结合，就可以得到带有tag的蛋白了。
求助，免疫共沉淀第一抗体应加多少较为合适
2楼：
不需要。或者说需要分开一个个证明。用一个抗体去做
ip，然后分别用3个抗体做ib,看你抓下的蛋白是否是3个蛋白复合物。
抗体（antibody）指机体的免疫系统在抗原刺激下，由b淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。 抗体通常由一些基础单元组成，每一个抗体包括：
两个长（大）的重链，以及两个短（小）的轻链。而轻链和重链之间以双硫键连接。轻链和重链又分为可变区和恒定区，而不同类型的重链恒定区，将会导致抗体种型的不同。
免疫共沉淀的磁珠怎么制作？
3楼：匿名用户
这应该是商业化的吧。如果你是要交联磁珠和抗体，试剂盒里应该有标准化的操作指南
我现在要做免疫共沉淀检测蛋白质与蛋白质之间的相互作用，我是个新手，从来没做过，我看过一些文献，文献
4楼：匿名用户
这个过程简单讲就是这么几步：
抽蛋白挂抗体到beads上，做成有亲和力的柱子（其实所谓“柱子”就是带有抗体的beads装到ep管里）
抽出来的蛋白去和柱子孵育，抗体识别的蛋白和与此蛋白互做的蛋白就挂到柱子上了
洗涤，将抗体不能结合的蛋白洗掉
洗脱，可以用蛋白电泳上样缓冲液将beads上的抗体，蛋白，蛋白结合蛋白一起洗下来
电泳wb检测
之所以叫免疫沉淀，是因为利用了抗体的亲和力，所以叫免疫，而沉淀的意思就是指，抗体挂到beads上，液体里面的物质用固相的beads可以分离出来，所以叫做沉淀。
而上面的7个步骤又会根据实际试验的情况发生变化。所以你看到文献上怎么做的人都有。
如果感兴趣，我建议你可以先读一些general的protocol，例如：http://****
pierce***.***/files/tr0064-immunoprecipitation-guide.pdf ，再根据自己的实际状况或者是实验的结果再进行选择。
5楼：匿名用户
很复杂的 还要看考虑对照组 你是用磁珠 还是 agarose beads？
免疫共沉淀的磁珠怎么制作？
6楼：匿名用户
这应该是商业化的吧。如果你是要交联磁珠和抗体，试剂盒里应该有标准化的操作指南
染色质免疫共沉淀的原理
7楼：手机用户
检测目标基因活性
在保持组蛋白和dna联合的同时，染色质被切成很小的片断，通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体，将目标片段（组蛋白发生特异标记的片段）沉淀下来。ip 是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein a”特异性地结合到免疫球蛋白的fc片段的现象活用开发出来的方法（免疫磁珠结合proteina，proteina结合抗体fc段，抗体结合抗原即发生特异标记的组蛋白，这里要注意组蛋白是和dna结合的，这样就把目标组蛋白和dna的符合物沉淀下来了）。在将组蛋白与dna分离，用获得的dna去做western blot ，从而检测那些基因的组蛋白发生了修饰。
检测已知蛋白的靶基因
在生理状态下把细胞内的蛋白质和dna交联在一起，超声波将其打碎为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过所要研究的目的蛋白质特异性抗体沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的dn**段，通过对目的片断的纯化与检测，从而明确蛋白与哪些基因相互作用。
目前多用精制的protein a预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein a就能吸附抗原达到精制的目的。实验最需要注意点就是抗体的性质。抗体不同和抗原结合能力也不同，免染能结合未必能用在ip反应。
建议仔细检查抗体的说明书。特别是多抗的特异性是问题。其次，要注意溶解抗原的缓冲液的性质。
多数的抗原是细胞构成的蛋白，特别是骨架蛋白，缓冲液必须要使其溶解。为此，必须使用含有强界面活性剂的缓冲液，尽管它有可能影响一部分抗原抗体的结合。另一面，如用弱界面活性剂溶解细胞，就不能充分溶解细胞蛋白。
即便溶解也产生与其它的蛋白结合的结果，抗原决定族被封闭，影响与抗体的结合，即使ip成功，也是很多蛋白与抗体共沉的悲惨结果。再次，为防止蛋白的分解，修饰，溶解抗原的缓冲液必须加蛋白每抑制剂，低温下进行实验。每次实验之前，首先考虑抗体/缓冲液的比例。
抗体过少就不能检出抗原，过多则就不能沉降在beads上，残存在上清。缓冲剂太少则不能溶解抗原，过多则抗原被稀释。
免疫共沉淀中igg有什么用 详细解释 谢谢
8楼：小学生
是抗体，用来与你感兴趣的蛋白结合，同时可以与包被有proteina/g结合，形成一个复合物。在离心或磁场的作用下，包被有proteina/g的小珠（如凝胶珠或磁珠）被分离出来，连带着你感兴趣蛋白被分离出来，如果你感兴趣的蛋白与其它蛋白有稳定的结合的话，也将被分离，通过鉴定这些连带被分离出来的蛋白，可以知道，哪些蛋白可能在机体内与你感兴趣的蛋白有相互作用。
蛋白质大小会影响免疫共沉淀结果吗
9楼：
这个过程简单讲就是这么几步： 抽蛋白 挂抗体到beads上，做成有亲和力的柱子（其实所谓“柱子”就是带有抗体的beads装到ep管里） 抽出来的蛋白去和柱子孵育，抗体识别的蛋白和与此蛋白互做的蛋白就挂到柱子上了 洗涤，将抗体不能结合的蛋白洗掉 洗。