1楼:匿名用户
如果说区别的话,免疫沉淀是单一的特异性抗
体结合其对应抗原,使之聚集沉淀。免疫共沉淀是a抗体结合a抗原,b抗体结合b抗原,如果a抗原能与b抗原相互作用而结合的话,最终aabb都连在一起沉淀,检测方法可以使用ab在一起激发荧光,分开无荧光,所以当检测到荧光则说明ab有相互作用,无则没相互作用,也可使a固定在固相载体,检测b,若检测到b则ab有相互作用,若没检测到则无相互作用。基本来说免疫沉淀是看有没有抗原抗体结合,免疫共沉淀则是看两个抗原有无相互作用
免疫共沉淀与免疫沉淀区别
2楼:匿名用户
不同的说法而已,实质一样。指的都是用抗体把相应蛋白拉下来,在用相应方法把他们分离出来,常用page胶。
3楼:维基生物
可能你是两个概念,应该说的是ip和pulldown,两者都是用蛋白来拉蛋白。ip是拉与目标蛋白互做的蛋白质,但是这个互做是保持了细胞内生物学状态,就是说更接近真实状态。pulldown就是拉目的蛋白质的互做蛋白,没有保持独立的活性,可能会拉下一些假阳性的的蛋白。
从实验上来说,ip要优于pulldown,但是ip的实验难度比较到,需要有ip级的抗体。
什么是免疫共沉淀?和免疫沉淀有啥区别
4楼:流式细胞术原理
免疫共沉淀基于抗原抗体特异性结合的原理,体外验证两种分子之间是否存在相互作用的技术。它是免疫沉淀的延伸。基本原理是在含有已知抗原的细胞裂解液中,将已知抗原作为靶蛋白,检测裂解液中可能存在与之有相互作用的蛋白。
加入特定的抗体以及protein a-beads,会形成“抗原-抗体-protein a-beads”的复合物。在抗原抗体特异性结合沉淀靶蛋白的同时,存在相互作用的蛋白也能被沉淀下来,最终得到“蛋白-蛋白”的复合物。验证是否有相互作用蛋白的存在。
免疫沉淀与免疫共沉淀实验原理及方法大致相似,所不同的是在免疫共沉淀中对靶蛋白的结合由另一个与之发生相互作用的蛋白所替代。因此实验属于ip还是co-ip取决于实验的目标是目的抗原还是相互作用蛋白质。
5楼:匿名用户
什么是免疫
共沉淀?和免疫沉淀有啥区别
免疫共沉淀的缺点:
(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;
(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;
(3)必须在实验前**目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若**不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。
(4)灵敏度没有亲和色谱高。
免疫共沉淀:
免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
免疫沉淀和免疫共沉淀在实验方法上具体有什么区别
6楼:搞一搞好
(1)收获细胞,加入适量细胞ip裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上或者4℃裂解30min, 12,000g离心30 min后取上清;(2) 取少量裂解液以备western blot分析,剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50 μl protein a/g-beads加入到细胞裂解液,4°c缓慢摇。
elisa和免疫共沉淀有什么不同?
7楼:匿名用户
简单地说elisa是检测是否存在某物质(如某种蛋白),而免疫共沉淀是为了检测目标蛋白与其他蛋白是否相互作用。elisa一般方法是将目的物质的抗体加入,再加入能够结合该抗体的另一种被修饰的抗体,后者修饰部分是具有一种酶活性可将某种物质催化形成有色物质,因此显色阳性反应说明存在目标物质。而免疫共沉淀是将蛋白x抗体结合在固定相上,将细胞非变性裂解后浸泡固定相,吸取没有结合的杂质后检测被结合组分,这样所有在细胞中能结合x的蛋白质就一起被分离出来,因此可确定体内条件下蛋白x是否和其他蛋白相互作用。
8楼:匿名用户
elisa 是酶联免疫吸附检测技术,是用来检测抗原或抗体的一种技术
当人工合成一些人工抗原时,还可以检测一些半抗原物质,如氯霉素,三聚氰胺,等等.而免疫共沉淀是用抗体将相应特定分子沉淀的同时,与该分子特异性结合的其他分子也会被带着一起沉淀出来的技术。这种技术常用于验证蛋白质之间相互特异性结合。
免疫共沉淀的缺点
9楼:北京索莱宝科技****
(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;
(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;
(3)必须在实验前**目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若**不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。
(4)灵敏度没有亲和色谱高。
免疫共沉淀:
免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
免疫共沉淀的注意事项
(1) 确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的,而并非外源非特异蛋白,单克隆抗体的使用有助于避免污染的发生;
(2) 要确保抗体的特异性,即在不表达抗原的细胞溶解物中添加抗体后不会引起共沉淀;
(3) 确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中,而不是由于细胞的溶解才发生的,这需要进行蛋白质的定位来确定。
10楼:▆▆▆丈
(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;
(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;
(3)必须在实验前**目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若**不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。
(4)灵敏度没有亲和色谱高。
请教gst pull-down assay和免疫共沉淀的区别
11楼:飞鸿love宏
gst pull-down一般指用一个带gst标签的重组蛋白,与目的蛋白进行孵育,最后用结合gst的beads拉下相互作用复合物。
免疫共沉淀一般是用某一蛋白的抗体,在细胞裂解液中与相应的蛋白结果,用protein a/g将抗原抗体复合物拉下,最后在拉下的复合物中检测目的蛋白的实验。
二者都是用于检测蛋白相互作用的实验。
区别是pull-down一般是验证 体外 相互作用;免疫共沉淀一般用于检测细胞水平的 体内 相互作用。
12楼:cofe_飞
两者原理和操作上都有一定的区别,比如做gst pull down的蛋白要有标签,但是做免疫共沉淀就用不到,但是做免疫共沉淀需要额外准备抗体。(当然gst蛋白也需要准备抗体,毕竟事后要做wb的)
另外两者都可以测两种已知蛋白是否有相互作用或利用已知蛋白去调未知蛋白。本质上没什么区别,根据自己的情况选择吧。
最后一点要说的就是,co-ip比较好的一点,就是可以模拟体内互作的情况,结果更真实一点。
免疫共沉淀的优点
13楼:北京索莱宝科技****
(1)相互作用
的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;
(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;
(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。
免疫共沉淀定义:
免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:
当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质x的抗体免疫沉淀x,那么与x在体内结合的蛋白质y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
免疫共沉淀的实验过程:
(1)转染后24-48 h 可收获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°c, 最大转速离心30 min后取上清;
(2)取少量裂解液以备western blot分析,剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液,4°c缓慢摇晃孵育过夜;
(3)取10μl protein a 琼脂糖珠,用适量裂解缓冲液洗3 次,每次3,000 rpm离心3 min;
(4)将预处理过的10μl protein a 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°c缓慢摇晃孵育2-4h,使抗体与protein a琼脂糖珠耦联;
(5)免疫沉淀反应后,在4°c 以3,000 rpm 速度离心3 min,将琼脂糖珠离心至管底;将上清小心吸去,琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3-4次;最后加入15μl的2×sds 上样缓冲液,沸水煮5分钟;
(6)sds-page, western blotting或质谱仪分析。
注意的问题:
(1)细胞裂解采用温和的裂解条件,不能破坏细胞内存在的所有蛋白质-蛋白质相互作用,多采用非离子变性剂(np40或triton x-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的,通过经验确定。不能用高浓度的变性剂(0.
2%sds),细胞裂解液中要加各种酶抑制剂,如商品化的cocktailer。
(2)使用明确的抗体,可以将几种抗体共同使用。
(3)使用对照抗体:
单克隆抗体:正常小鼠的igg或另一类单抗
兔多克隆抗体:正常兔igg
14楼:孤独患者
(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;
(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;
(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。
免疫共沉淀阴性对照的意义是什么?
15楼:浙大阿米巴
因为要排出污染的可能性。
比如你检测一个兔子细胞的某种蛋白质,你没有设置igg的对照,而操作中有非特异性蛋白质,又和你设计的抗体作用,那么就出现了阳性结果。如果做了阴性对照,也就是igg对照,对照没有出现阳性就说明没有非特异性的蛋白,对照出现阳性,说明你的抗体有非特异结合的可能,需要重新开始实验。
16楼:匿名用户
怕你的目标蛋白能与抗体相互作用,比如说你要沉淀的蛋白跟金黄色葡萄球菌的a蛋白或补体很类似,你就无语了!
共沉淀与继沉淀有什么区别,沉淀和共沉淀区别是什么?共沉淀过程中要注意哪些问题?
1楼 匿名用户 当沉淀从溶液中析出时溶液中的某些可溶性组分也同时沉淀下来的现象称为共沉淀 当沉淀与母液一起放置时 溶液中某些杂质离子可能慢慢地沉积到原沉淀上 放置时间越长 杂质析出的量越多 这种现象称为继沉淀 由继沉淀引入杂质的量比共沉淀多 且随沉淀在溶液中放置时间的延长而增多 满意请采纳 沉淀和共...