1楼：匿名用户
1 用于培养流感病毒的细胞11 细胞株的选择 在最初培养流感病毒的时候用鸡胚,但鸡胚分离流感病毒容易引起病毒便变异和过敏性反应,还存在大规模生产时外源病毒的污染问题。而运用vero和mdck细胞培养流感病毒不但解决了上述问题,还使得病毒的免疫原更稳定。戚凤春[1]等人研究发现,相同的实验条件下,在mdck细胞上培养的病毒ha滴度明显高于vero细胞,因此我们培养流感病毒细胞株的选择mdck细胞,其代数最好小于35代,细胞过老会使病毒不容易负载。
12 细胞最佳负载病毒的胞龄 mdck细胞繁殖非常旺盛,必需只能提前一天将细胞培养瓶里的细胞接种在六孔板中,如果负载病毒用胞龄为两天的mdck细胞,那么病毒培养的阳性率几乎为0,而胞龄为12-24h的mdck细胞对病毒的负载阳性率区别不大[2]。13 细胞负载病毒的最佳密度 首先,mdck细胞的密度不能太稀,这种细胞密度太稀则不能生长,也不能让细胞密得堆积起来,那样也会很大程度降 低病毒接种的阳性率。最好使细胞刚刚铺满孔,这时负载病毒后收获病毒的ha滴度最高。
当工作人员提前一天将细胞接种在6孔板中时,应考虑细胞的生长速度,使其第二天负载病毒时的细胞密度适当。其次,mdck细胞接种六孔板时要密度均匀,容易出现的情况是细胞都聚集在孔的边缘,而中间密度过稀,这样也会影响病毒负载的阳性率。避免这种情况出现就要工作人员手法熟练,如果出现了这种情况,将培养板轻轻晃动(避免液体溅出),能有效改善细胞的分布。
2 培养流感病毒的试剂 用于培养流感病毒试剂的不同也会很大程度影响病毒培养 阳性率。首先,不使用过期的试剂;其次,最好使用知名厂家的试剂,比如gibco等;再次,使用前将试剂从冰箱拿出一段时间,最好等试剂的温度已经平衡到室温再用。如果是给细胞换代,过冷的试剂会影响细胞的生长状态;如果是负载病毒前洗细胞用,过冷的试剂会使细胞突然皱缩而病毒培养的阳性率。
3 样品 31 样品的存放 样品存放的时间直接影响病毒负载的阳性率,标本越新鲜,病毒培养的阳性率越高。如果样品不能及时负载细胞,应将样品放在-70!冰箱中,避免反复冻融,冻融次数越多,病毒培养的阳性率越低。
注意不能将样品放在-20!的冰箱中,流感病毒在-20!非常不稳定,如果当天的样本要第二天才能接种,应将样品放在4!
冰箱中。32 样品的无菌处理 因为样品的采样条件不可能无菌,虽然采样液中有抗生素,也不能保证细菌全被杀死,所以阳性样本最好过滤到无菌的15ml离心管中备用。有些工作人员采用往细胞培养板中加抗生素避免污染,这样虽然省事,但会对细胞有伤害,从而降低了病毒培养的阳性率。
4 病毒负载的操作步骤41 细胞洗涤 将六孔板中的细胞培养液倒去,用hbss洗涤每一孔三遍以上,其作用是洗去残留的fbs,fbs通过抑制胰酶而抑制流感病毒的复制。将洗液倒去后,应立即加入洗液或病毒液,过长时间将细胞暴露在空气中将很大程度降低病毒培养的阳性率,最好将细胞暴露在空气中的时间缩短在5秒以内。42 病毒液的接种量 病毒液的接种很有讲究。
负载在细胞上的病毒液应大于300u,l否则不够盖过整孔细胞。待37!孵育1~2h后,不管开始负载了多少体积的病毒液,都应在每孔留300ul病毒液再加入病毒培养基,若病毒液全都弃去或留得太少,会使病毒培养阳性率大打折扣;若病毒液留得太多,比如超过400u,l也会使阳性率降低很多,因为存留过多的缺损病毒会严重影响正常病毒的复制。
43 病毒液的孵育时间 理论上,病毒液在37!孵育1~2h都可以,但我们发现1h还是太短,最好在1h15min加入病毒培养基,不要时间过长,那样也会使病毒培养的阳性率降低,可能是因为采样液的ph值和病毒培养基不同,孵育时间稍长导致细胞受到损伤。而盲传的时候,孵育的时间可以到2h以上,因为这时候所用的病毒液也是病毒培养基,而不是采样液。
44 病毒培养基的配制 病毒培养基是用dmem加入hepes和胰酶配制而成的,hepes的作用是加强体系的缓冲能力,胰酶的作用是将病毒粒非裂解型的ha0变成裂解型的ha1+ha2,从而提高流感病毒在细胞中的复制能力,因为流感病毒只有血凝素(h)是裂解型的才具有感染性。但是hepes和胰酶在dmem在4!共存时间过长会引起ph值上升,所以病毒培养基我们一般都是现配现用。
45 病毒ha滴度的测定 cpe出现时间随病毒的型别和毒株的差异以及感染量的大 小而异。我们将标本接种后3d观察是否出现cpe,出现cpe的测定ha滴度,滴度大于8则收获病毒,用hi实验测定病毒亚型,病毒滴度小于8进行盲传,再在第3d测定ha滴度。若负载病毒7d还不出现cpe,维持液中又查不出ha活性,可认为阴性标本,弃之。
3d时间出现病毒滴度的 最高峰, 4d和2d都低于3d时病毒的滴度。收获毒株前,将 细胞于-80!/37!
冻融一次,有利于增加病毒的ha滴度。
怎么培养流感
2楼：匿名用户
流行**冒（简称流感）是流感病毒引起的急性呼吸道感染，也是一种传染性强、传播速度快的疾病。其主要通过空气中的飞沫、人与人之间的接触或与被污染物品的接触传播。典型的临床症状是：
急起高热、全身疼痛、显著乏力和轻度呼吸道症状。一般秋冬季节是其高发期，所引起的并发症和死亡现象非常严重。该病是由流感病毒引起，可分为甲（a）、乙（b）、丙（c）三型，甲型病毒经常发生抗原变异，传染性大，传播迅速，极易发生大范围流行。
甲型h1n1也就是甲型一种。本病具有自限性，但在婴幼儿、老年人和存在心肺基础疾病的患者容易并发肺炎等严重并发症而导致死亡。
1.潜伏期
潜伏期一般为1～7天，多数为2～4天。
2.表现
（1）单纯型流感 常突然起病，畏寒高热，体温可达39～40℃，多伴头痛、全身肌肉关节酸痛、极度乏力、食欲减退等全身症状，常有咽喉痛、干咳，可有鼻塞、流涕、胸骨后不适等。颜面潮红，眼结膜外眦轻度充血。如无并发症呈自限性过程，多于发病3～4天后体温逐渐消退，全身症状好转，但咳嗽、体力恢复常需1～2周。
轻症流感与普通感冒相似，症状轻，2～3天可恢复。
（2）肺炎型流感 实质上就是并发了流感病毒性肺炎，多见于老年人、儿童、原有心肺疾患的人群。主要表现为高热持续不退，剧烈咳嗽、咳血痰或脓性痰、呼吸急促、发绀，肺部可闻及湿啰音。胸片提示两肺有散在的絮状阴影。
痰培养无致病细菌生长，可分离出流感病毒。可因呼吸循环衰竭而死亡。
（3）中毒型流感 表现为高热、休克、呼吸衰竭、中枢神经系统损害及弥漫性血管内凝血（dic）等严重症状，病死率高。
（4）胃肠型流感 除发热外，以呕吐、腹痛、腹泻为显著特点，儿童多于**。2～3天即可恢复。
（5）特殊人群流感 临床表现①儿童流感 在流感流行季节。一般健康儿童感染流感病毒可能表现为轻型流感，主要症状为发热、咳嗽、流涕、鼻塞及咽痛、头痛，少部分出现肌痛、呕吐、腹泻。婴幼儿流感的临床症状往往不典型，可出现高热惊厥。
新生儿流感少见，但易合并肺炎，常有败血症表现，如嗜睡、拒奶、呼吸暂停等。在小儿，流感病毒引起的喉炎、气管炎、支气管炎、毛细支气管炎、肺炎及胃肠道症状较**常见。②老年**感 65岁以上流感患者为老年流感。
因老年人常存有呼吸系统、心血管系统等原发病，因此老年人感染流感病毒后病情多较重，病情进展快，发生肺炎率高于青壮年人，其他系统损伤主要包括流感病毒性心肌炎导致的心电图异常、心功能衰竭、急性心肌梗死，也可并发脑炎以及血糖控制不佳等。③妊娠妇女流感 中晚期妊娠妇女感染流感病毒后除发热、咳嗽等表现外，易发生肺炎，迅速出现呼吸困难、低氧血症甚至急性呼吸窘迫综合征可导致流产、早产、胎儿窘迫及胎死宫内。可诱发原有基础疾病的加重，病情严重者可以导致死亡。
④免疫缺陷人群流感 免疫缺陷人群如器官移植人群、艾滋病患者、长期使用免疫抑制剂者，感染流感病毒后发生重症流感的危险性明显增加，由于易出现流感病毒性肺炎，发病后可迅速出现发热、咳嗽、呼吸困难及发绀，病死率高。
如何正确认识流感病毒？
3楼：一纸青辞
时刻防卫、但绝不恐惧。
流行**冒，简称“流感”，是流感病毒引起的急性呼吸道感染，也是一种传染性强、传播速度快的疾病。该病是由流感病毒引起，可分为甲（a）、乙（b）、丙（c）三型。根据疾控部门统计，流行的以乙型流感病毒为主。
诊断流感并不麻烦，医生们常用病毒性抗原检测，比如取一点鼻咽部的分泌物，检测呼吸道上皮细胞中的病毒抗原，十来分钟即可出结果，阳性结果有助诊断。根据病情有时候还会验一下血看看有没有合并细菌感染。
医生通常会开具口服药物，这些药的安全性也相对比较高。如果合并细菌感染，也会给予抗生素，请遵医嘱用药。只有少数病情较重的患儿才需要住院**。
打喷嚏或咳嗽时应用手帕或纸巾掩住口鼻，避免飞沫感染他人。流感家属在家或外出时佩戴口罩，以免传染给他人。
由于流感流行具有一定的规律性和变异性，所以疾控部门会根据动态监测统计数据，选育新的流行株制造疫苗，接种后2-4周可产生保护性抗体，作用可维持半年左右。
病毒的培养方法有哪些？
4楼：匿名用户
动物接种、鸡胚培养、组织培养、细胞培养。
1、动物接种：病毒经注射、口服等途径进入易感动物的体内后可大量增殖，并使动物产生特定的反应。优点：
操作方面易行。缺点：受机体免疫力的影响，常需要用无菌动物。
疫苗和抗血清的生产。
2、鸡胚培养：一般用9-12日龄的鸡胚，分别接种于卵黄囊内，羊膜腔，尿囊腔等部位。用于病毒分离与疫苗生产。
3、组织培养：在离体活细胞上培养病毒的方法，组织块培养：取组织片进行培养。
细胞培养：病毒感染细胞后，大多数引起细胞病变，称为病毒的致细胞病变作用。表现为细胞变形，胞浆内出现颗粒化，核浓缩、核裂解等。
4、采用该病毒所寄生的细胞的全素培养基来培养该细胞，培养一段时间后放进特定的病毒就可以培养了，注意，若细胞是动物细胞时培养基要加入血清。