共定位 免疫荧光 是什么,做免疫荧光抗体选择问题。

2021-03-11 08:02:37 字数 2556 阅读 2438

1楼:糟油酒丸

免疫荧光可以bai用于共定位du,但也可以用于很zhi多其他应用。共定dao位不能够说是免疫专荧光的主要用途。

一楼回答有属助于理解共定位,但是“加上红色/绿色荧光蛋白的标签”这种说法并不是免疫荧光的做法。在免疫荧光中,与目标蛋白相结合的是带有荧光分子基团的抗体,此种抗体虽然发荧光,但不称为荧光蛋白。

另外,共定位不能够用于证明相互作用,更不可能证明蛋白之间的共价结合。

共定位就如字面意思上所说的,只能够表明蛋白a和b都在此细胞有表达,并且在同样的细胞内位置/细胞器。

就好像你用***看到,有两个人a和b此时都在某市同一家咖啡厅内,并不能够证明他们在幽会。但是如果说因为同时在一处这个事实而怀疑有奸情,也并不全是毫无道理,只是需要别的手段来证明罢了。

2楼:糟油酒丸

免疫荧copy光可以用于共定位,但也可以用于很多其他应用。共定位不能够说是免疫荧光

的主要用途。

一楼回答有助于理解共定位,但是“加上红色/绿色荧光蛋白的标签”这种说法并不是免疫荧光的做法。在免疫荧光中,与目标蛋白相结合的是带有荧光分子基团的抗体,此种抗体虽然发荧光,但不称为荧光蛋白。

另外,共定位不能够用于证明相互作用,更不可能证明蛋白之间的共价结合。

共定位就如字面意思上所说的,只能够表明蛋白a和b都在此细胞有表达,并且在同样的细胞内位置/细胞器。

就好像你用***看到,有两个人a和b此时都在某市同一家咖啡厅内,并不能够证明他们在幽会。但是如果说因为同时在一处这个事实而怀疑有奸情,也并不全是毫无道理,只是需要别的手段来证明罢了。

3楼:du知道君

免疫荧光可以用于共定位,但也可以用于很多其他应用。共定位不能专够说是免疫荧光的主要用途。属 一楼回答有助于理解共定位,但是“加上红色/绿色荧光蛋白的标签”这种说法并不是免疫荧光的做法。

在免疫荧光中,与目标蛋白相结合的是带有荧光分子基团的抗体,此种抗体虽然发荧光,但不称为荧光蛋白。 另外,共定位不能够用于证明相互作用,更不可能证明蛋白之间的共价结合。 共定位就如字面意思上所说的,只能够表明蛋白a和b都在此细胞有表达,并且在同样的细胞内位置/细胞器。

就好像你用***看到,有两个人a和b此时都在某市同一家咖啡厅内,并不能够证明他们在幽会。但是如果说因为同时在一处这个事实而怀疑有奸情,也并不全是毫无道理,只是需要别的手段来证明罢了。

共聚焦显微镜可以先显示转染进去的绿色荧光,再显示荧光二抗么

4楼:

(62616964757a686964616fe4b893e5b19e313333633764311) 利用有色荧光蛋白标记技术进行蛋白定位研究

此法也可称为活细胞定位.把两种具有相互作用的蛋白分别克隆到带有两种不同颜色荧光

蛋白(绿色荧光蛋白或红色荧光蛋白)的载体中,共转染到功能细胞中(一般选用 cos7 细胞)表达带有荧光的融合蛋白.这样,相互作用的两种蛋白就被标上不同的荧光,可以在细胞内用荧光显微镜直接观测.在进行精确细胞定位或共定位时,必须用共聚焦荧光显微镜观测.

因为共聚焦荧光显微镜(相当于给病人诊断的 ct)观测的是细胞内一个切面上的颜色.如果在一个切面上在同一区域看到两种颜色,就提示这两种蛋白在该区域内有相互作用.普通荧光显微镜看到的是一个立体图象,无法确定蛋白质共定位现象.

在进行定位或共定位同时,也可以对细胞核进行染色.这样,在细胞中就有三种颜色.细胞核的显色帮助你确定共定位发生的位置.

上面介绍的活细胞定位,其优点是表达的荧光蛋白荧光强,没有背景,观测方便.但缺点

是相互作用的蛋白由于标上荧光蛋白,实际上是两个融合蛋白.融合蛋白的定位结果或共定位结果是否与天然蛋白分布一致,有待于进一步确定.而利用免疫荧光标记技术可以避免这一缺点.

(2) 利用双色或多色染色的免疫荧光技术进行蛋白定位研究

免疫荧光的原理是,首先把细胞进行固定,然后用待检测靶蛋白的抗体(一抗)与细胞内

靶蛋白进行免疫反应,再用荧光素(如 fitc 和 tritc 等)标记的二抗与一抗进行反应.这样就在细胞内形成免疫复合物(靶蛋白----一抗---二抗),结果靶蛋白被标上颜色,然后可用共聚焦荧光显微镜观测定位与共定位结果.

免疫荧光技术最大优点就是可用来检测细胞内源性蛋白的定位及相互作用.当然也可以对

靶细胞进行转染表达目的蛋白,然后标记目的蛋白进行观测.免疫荧光技术的缺点是荧光相对较弱并且背景较高,结果受到干扰,所以这项技术不好掌握.为了结果的可靠性,要求严格设计阳性对照与阴性对照.

(3) 细胞内蛋白动态定位

有时细胞在正常状态下,有相互作用的蛋白在胞内可能暂时分开,没有共定位现象发生.

但是在某一个特定情况下,如细胞受到外界刺激时,细胞本身会产生应急反应,这时暂时分离的蛋白有可能发生相互作用,并产生共定位现象.所以在进行共定位研究时,可根据具体情况具体分析,必要时观测细胞内蛋白动态定位结果.

做免疫荧光抗体选择问题。

5楼:匿名用户

这个貌似挺困难的。。。

自己做一抗

或者别家公司去看看

或者给病毒组分带上不同荧光标记,就是重组病毒了。。。

你要用什么仪器观察病毒呢?

是直接看病毒,还是看病毒组分在细胞、动物、植物中的定位?

请教免疫荧光双标中荧光二抗的选择是否合适

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