植物的保存有哪些常用的化冻方法,植物的超低温保存有哪些方法?

2021-01-03 21:59:45 字数 4162 阅读 6357

1楼:中国农业出版社

目前常用化冻方法有两种:一是快速化冻法。将样品直接放在37摄氏度水浴中化冻。

优点是可使样品快速地通过刚刚低于熔点这一特别易引起伤害的温度危险区。但是也有例外,如对于缓慢降温到-80摄氏度的胚来说,相对较低的升温速率(20摄氏度min)常带来较高的存活率。

二是慢速化冻法。在0摄氏度、23摄氏度或室温下进行化冻,如木本植物的冬芽在0摄氏度下化冻可获得最高的存活率,这是因为冬芽在秋、冬低温锻炼以及慢速化冻的过程中,细胞内的水已最大限度地流到细胞外结冰,如果快速化冻吸水时会受猛烈地渗透冲击,从而引起细胞膜破坏。许多研究已经表明,缓慢升温可使细胞内冰晶生长,而快速升温可取得相对较高的成活率。

植物的超低温保存有哪些方法?

2楼:中国农业出版社

常规超低温保存:常规超低温保存通过调控预培养、冷冻保护剂处理时间、降温速度和转移温度等关键环节,创造合适的脱水程度,实现超低温保存。

a.预培养和低温处理:茎尖、愈伤组织、悬浮细胞、花粉、胚等器官或组织,均可作为超低温贮存的材料。

在贮存前往往应对外植体进行预培养和低温处理,以提高组织细胞的抗寒力。预培养一般需712d,培养基中加入能提高抗寒力的物质如山梨糖醇、脱落酸或增加糖浓度等。

低温处理的做法一般是将外植体放在23摄氏度低温下锻炼数天,处理后可明显提高材料的抗冻力。有的甚至将植物材料在放入液氮,经过-20摄氏度或-70摄氏度的低温预冻,仍可取得较好效果。b.

冷冻保护剂处理:超低温处理前,还必须进行冷冻保护剂处理。其方法是:

先将保护剂预冷至0摄氏度,等体积与培养基混合,静置3060min。这是因为dmso等保护剂有毒,所以必须在0摄氏度下处理,而且处理时间不宜过长,一般不超过1h。c.

降温冷冻:材料以冷冻保护剂处理3060min后,应立即降温冷冻,最后达到液氮低温保存。从0-196摄氏度的降温过程。

d.化冻方法:化冻是再培养能否成功的关键。

升温给细胞造成的伤害并不亚于降温带来的伤害。升温损伤主要是降温过程中形成的小冰晶重新增长的结果,同时化冻过慢,从-1960摄氏度的升温过程中,细胞内玻璃化水可能会发生次生结冰,从而破坏细胞结构,导致死亡。

植物的干燥冷冻法保存有哪些关键?

3楼:中国农业出版社

干燥冷冻法的关键在于采用合适的脱水方式,使其含水量降到一定程度后,再投入液氮保存。

目前干燥冷冻法常用的脱水方法有三种。一是直接干燥脱水,不以任何冷冻保护剂处理,直接在层流橱等无菌空气流、真空等中干燥脱水,但一些研究结果表明,此法对保存材料的再生能力有较大的削弱,需进一步改进,因此应用不多。二是高浓度蔗糖预处理,此法的关键是保存不同种质培养基的蔗糖浓度及处理时间。

三是高浓度蔗糖预处理,再用无菌空气或硅胶等干燥脱水。

植物保存的玻璃化方式是怎样做的?

4楼:中国农业出版社

玻璃化法冻存程序抄

因材料的不同bai略有差异。据报道,薄du荷茎尖、梨zhi茎尖、三叶草顶端分生组织等需dao要预培养;康乃馨和甜薯等茎尖和分生组织不需要预培养。

有的材料不需要添加剂添加前过渡,如冻存康乃馨茎尖和马铃薯茎尖;有的材料保护剂则需逐级添加和分成分添加,如冻存薄荷茎尖和甜薯茎尖。

过渡处理能增加保护性成分向细胞渗入,减轻细胞在脱水时的损伤。保护剂的毒性及渗透损伤和程度与保护剂的浓度和保护剂处理时间和温度有关。因此,玻璃化保护剂的处理时间和处理温度是一个关键环节,不同材料差异较大。

化冻后洗涤既可除去高浓度的保护剂,又是一个过渡。洗涤液的浓度非常重要,洗涤液的渗透压过高,细胞会因高渗而损伤,过低则会由于膨胀而损伤。常用的洗涤方法是:

1.2moll蔗糖浓度的培养基25摄氏度,洗涤10min。

植物的玻璃化法保存有哪些特点?

5楼:中国农业出版社

玻璃化法保存的原理和特点:包埋脱水法是指将包含有样品的褐藻酸钠专溶液滴向高钙溶液,因

属褐藻酸钙的生成而固化成球状颗粒,同时辅以高浓度蔗糖预处理样品,使样品获得高的抗冻力和抗脱水力后,结合适当的脱水和降温方式,液氮下保存。包埋脱水法与玻璃化法有所不同,玻璃化法采用高浓度的复合玻璃化保护剂脱水样品,减轻了两步法保存过程中的机械损伤和溶液效应,而包埋脱水法采用高浓度的蔗糖预处理样品,避免二甲基亚砜和甘油的化学毒性,它对低温保护剂敏感的植物样品有着很大的应用潜力。

样品在用褐藻酸钠和氯化钙包埋后,避免其裸露时可能受到的损伤,使样品所处的环境更为恒定。

同时,包埋过程也是一个制作人工种子的过程。因此,包埋脱水法可以较大限度地使待保护材料的结构不致因实验处理或操作中的温度急剧变化而遭破坏;不需昂贵、复杂的降温设备,降温过程不甚严格;样品易于操作,被保存样品体积可以比较大;样品可以获得较高的抗冻力,提高保存效果,使保存后的样品不经愈伤组织直接成苗,降低了遗传变异的可能。油菜小孢子胚、咖啡的体胚、甘蔗茎尖和分生组织等经包埋脱水法保存,其遗传特性保持稳定。

从植物中提取汁液,并长期保存,有什么办法?

6楼:匿名用户

可以考虑榨汁除菌提取有效成分~ 不知道加热和紫外线会不会破坏有效成分?可以参考牛奶的灭菌方法。

7楼:匿名用户

为什么不考虑在住的地方养一棵小的

8楼:匿名用户

用榨,用药汁榨出来,保鲜待研究

植物的超低温保存有哪些作用?

9楼:中国农业出版社

超低温(ultra-low:temperature)通常指低于-80摄氏度的低温。

超低温保存一般是-196摄氏度(液氮)的超低温下使保存的活细胞的物质代谢和生长活动几乎完全停止。这种方法不仅能够保持生物材料的遗传稳定性,而且也不会丧失其形态发生的潜能,有利于保存和抢救物种,尽可能避免组织、细胞继代培养及自然界中积累性突变等的发生,正成为长期稳定地保存植物种质资源及珍贵实验材料的一个重要方法。近半个世纪以来,超低温保存技术发展很快,尤其在医学和畜牧业中,利用超低温冷冻技术成功保存了动物和人的各种细胞和器官。

相对于动物细胞而言,植物细胞体积大、液泡化程度高,对冷冻极敏感,因此植物细胞超低温保存技术难度大。

关于植物材料超低温保存的首次报道是将胡萝卜悬浮培养细胞保存在液氮中,解冻后观察其细胞生长(nag和treet,1973)。迄今为止,用超低温保存成功的植物已超过100种。所研究过的植物材料有种子、芽及茎尖分生组织、原生质体。

超低温保存植物技术,包括材料选择、预处理、冷冻及保存、融化、后处理、活力评价、再生等,有的已较为成熟,并在许多植物种质中得到应用。超低温保存早期大多采用冻结化保存技术,主要有快速冷冻和慢速冷冻两种方法,现在新发展的有玻璃化法、干燥冷冻法、包埋脱水法等新方法。

植物保存的再培养有哪些作用?

10楼:中国农业出版社

再培养:细胞的再

来生长是最终检验自细胞活力的bai

惟一可靠方法du。

冷冻和洗涤zhi后,立即将保存材料转移到新dao鲜培养基上进行再培养,并观测组织的复活情况、存活率、生长速度、组织块大小和重量的变化,以及分化产生植株的能力和各种遗传性状的表达。其中存活率是检测保存效果的最好指标,它用重新生长细胞(或器官)数目占解冻细胞(或器官)数目的百分比表示。

超低温保存的原理是什么?

11楼:中国农业出版社

超低温保存时,降温冷冻和化冻过程最易引起植物材料的伤害。

在降温冷冻过程中,植物组织或细胞遭受冻害主要有两个方面的原因,即细胞内部结冰和细胞内溶质的浓缩。由于细胞质最初是高渗透压的,故而一般先使细胞外结冰,使得细胞膜内外的渗透压梯度发生反转,即发生细胞失水并逐渐变为脱水状态,导致细胞的溶质也相应地发生浓缩。当细胞收缩超过临界值时,会造成细胞的损伤。

一般说来,慢速降温可使细胞内的水不断流到细胞外结冰,而快速降温时,细胞内的水来不及流到细胞外而造成胞内结冰。

因此,在降温冷冻过程中必须创造一个适宜的条件,使植物材料发生保护性脱水。冬季的植物材料,由于经过抗寒锻炼已经发生了保护性脱水及其他提高抗寒力的变化,所以采用冬季植物材料超低温保存容易获得成功。采用一些“冷冻保护剂”或称“防冻剂”可明显地增强生物组织的抗冷和耐冷能力,目前实践中往往采用如二四基亚砜、聚乙二醇(peg)、甘油及多种糖类等多种防冻剂配合使用以提高效果。

在化冻时要防止细胞内次生结冰,因此,多数情况下采用快速化冻方法,即在3440摄氏度温水中化冻。

植物的超低温保存有哪些作用,植物的超低温保存主要有哪些设备?

1楼 中国农业出版社 超低温 ultra low temperature 通常指低于 80摄氏度的低温。 超低温保存一般是 196摄氏度 液氮 的超低温下使保存的活细胞的物质代谢和生长活动几乎完全停止。这种方法不仅能够保持生物材料的遗传稳定性,而且也不会丧失其形态发生的潜能,有利于保存和抢救物种,尽...

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