1楼：匿名用户
产脂肪酶菌株的筛选实验目的:以橄榄油作为唯一碳源筛选出能产生出脂肪酶的菌株。橄榄油乳化法是测定脂肪酶活性的常用方法，其测定的原理是天然油脂被水解产生的游离脂肪酸可以被氢氧化钠中和。
榄油乳化：聚丙烯醇3:1橄榄油乳化，水包油型，然后装在合适的瓶子里。
实验原理：脂肪酶是一类特殊酯键水解酶，产脂肪酶的微生物广泛的分布，主要以各类真菌为主；在富含油脂的地方进行采样，利用稀释平板分离法筛选产脂肪酶菌株，再以乳化橄榄油为底物。脂肪酶作用于橄榄油乳化液，催化酯键水解，生成脂肪酸，用标准氢氧化钠滴定脂肪酸，利用酚酞滴定终点，记录消耗的氢氧化钠体积，根据氢氧化钠的用量来计算脂肪酶的活力。
材料：烧杯、玻璃棒、锥形瓶、试管、平板、接种环、制备乳化状态的针筒等。土壤采集：
在土门菜市场油污重地进行土壤采样。富集培养基配置：硫酸铵0.
1%磷酸氢二钾0.1%七水硫酸镁0.05%七水硫酸亚铁0.
001%酵母膏0.5%橄榄油乳化液12%氯化钠l%ph自然，115℃灭菌30min选择培养基平板：乳化橄榄油12%蛋白胨1%硫酸铵0.
2%磷酸氢二钾0.1%磷酸二氢钾0.3%七水硫酸亚铁0.
1%维多利亚蓝0.004%琼脂1.5%ph=8.
0灭菌115℃30min复筛培养基平板：乳化橄榄油12%蛋白胨1%硫酸铵0.2%磷酸氢二钾0.
1%磷酸二氢钾0.3%七水硫酸亚铁0.1%琼脂1.
5%ph=8115℃灭菌30min实验方法：1、取土样2g悬无菌水中，**，在100ml培养基中加入5ml的悬液，30℃180r/m培养3d。2、取富集液稀释分别涂布于选择培养基平板上，经培养观察菌落周围的蓝色圈，然后挑取该菌落于富集培养基斜面上。
30℃培养箱3d。3、将初筛得到的菌株在复筛培养基平板划线，然后放于30℃培养箱中3d。4、挑取单菌落，镜检并纯化，得到纯菌株保存。
5、活力测定：u=(v-v.)/t×50×n。
6、u=酶活（微摩尔/min）v=样品耗碱量（ml),v.=空白耗碱量（ml),50=1ml0.05mol/l氢氧化钠的微摩尔数，t=反应时间（min),n=稀释倍数脂肪酶的活力的测定：
1、测定方法很多:酸碱滴定法，电位滴定法，浊度测定法，甘油测定法，色谱分析法等。2、常用的检测手段为酸碱滴定，在酸碱滴定的方法中，有直接进行滴定的，也有先用疏水有机溶剂抽提出脂肪酸，再进行滴定的。
活性测定选择时注意：1、由于反应体系中存在缓冲液的缓冲作用，因此直接滴定法的合理性常令人怀疑，更容易给科研人员造成困惑，而且直接滴定法的稳定性一般都不十分理想。2、根据脂肪酸和铜离子形成铜皂的原理利用分光光度法(715nm附近)进行脂肪酶活力的检测，但是由于实验中使用大量苯进行铜皂的萃取，容易造成污染和对人体造成伤害，因此使用该方法的人少。
3、三丁酸甘油醋和三油酸甘油酷作为底物的时候，脂肪酶活力检测的结果比较稳定，但是由于三丁酸甘油醋和三油酸甘油酷**比较昂贵，因此使用的人很少。4、辛酸对硝基苯酚酷自水解的速度比较快，因此检测脂肪酶活力的时候，误差比较大;而乙酸对硝基苯酚醋水解的速度比较缓慢，因此实验误差相对较小，但是辛酸对硝基苯酚醋和乙酸对硝基苯酚醋都不是脂肪酶的天然底物，一般认为不适合作为脂肪酶活力检测的底物，尤其用乙酸对硝基苯酚酷作为底物，其检测的活力作为醋酶活力似乎更合理一些。5、本实验筛选得到的野生菌株产胞外脂肪酶活性较小，采用将传统的直接酸碱滴定法加以改进的方法来检测脂肪酶活性。
应用：1、中国食品质量报脂肪酶是酶制剂中的一员，在酒类酿造、蔬菜加工、面包生产、乳品生产、油脂加工等中应用广泛，是优良的食品改质剂。2、该酶能分解各种天然油脂，分解油脂的容易程度为：
c18：3＞c18：2＞c18：
1＝c16：0＞c18：0＞c22：0
测定脂肪酶活力时一定要用橄榄油吗
2楼：月醉潇湘
测定脂肪酶活力时一定
要用橄榄油。
脂肪酶酶活力检测标准 gb-t 23535-2009标准规定使用橄榄油(分析纯)；
底物溶液：
按4%聚乙烯醇：橄榄油=3:1比例混合，用高速匀浆机处理6min（分两次处理，间隔5min，每次处理3min）。
ph7.5磷酸缓冲液：称取十二水磷酸氢二钠39.62g，磷酸二氢钾1.96g，用水溶解并定容至500ml，调节溶液的ph到7.5±0.05。
脂肪酶是一种特殊的酯键水解酶，它可作用于甘油三酯的酯键，使甘油三酯降解为甘油二酯、单甘油酯、甘油和脂肪酸。
酶是一种活性蛋白质。因此，一切对蛋白质活性有影响的因素都影响酶的活性。酶与底物作用的活性，受温度、ph值、酶液浓度、底物浓度、酶的激活剂或抑制剂等许多因素的影响。
脂肪酶在微生物中有广泛的分布，其产生菌主要是霉菌和细菌。已经公布的适用于甘油三酯加工的不同**的脂肪酶有33种，其中18种来自霉菌，7种来自细菌。
脂肪酶可将甘油酯（油、脂）水解，在不同阶段可释放出脂肪酸、甘油二酯、甘油单酯及甘油。水解生成的脂肪酸，可以用标准的碱溶液滴定，以滴定值表示酶活力。
反应式为：rcooh+naoh → rcoona+h2o
工业用脂肪酶酶活测定时，用乳化油法反而没有用老的未乳化的方法测出的酶活高？
3楼：匿名用户
第一个问题你可以适当加些氯化钠 增加酶蛋白的溶解性；
第二个有点难理解 按理说这个界面反应肯定是乳化后的好 你的pva乳液弄好后是什么状态的？还有后来滴定的时候是怎么取样的，还是整个体系一起滴定？
从什么可买得到的产品中可以分离出产脂肪酶的微生物
4楼：美涵雅云
产脂肪酶菌株的筛选
实验目的:
以橄榄油作为唯一碳源筛选出能产生出脂肪酶的菌株。橄榄油乳化法是测定脂肪酶活性的常用方法，其测定的原理是天然油脂被水解产生的游离脂肪酸可以被氢氧化钠中和。榄
油乳化：聚丙烯醇3:1橄榄油乳化，水包油型，然后装在合适的瓶子里。
实验原理：
脂肪酶是一类特殊酯键水解酶，产脂肪酶的微生物广泛的分布，主要以各类真菌为主；在富含油脂的地方进行采样，利用稀释平板分离法筛选产脂肪酶菌株，再以乳化橄榄油为底物。脂肪酶作用于橄榄油乳化液，催化酯键水解，生成脂肪酸，用标准氢氧化钠滴定脂肪酸，利用酚酞滴定终点，记录消耗的氢氧化钠体积，根据氢氧化钠的用量来计算脂肪酶的活力。
材料：烧杯、玻璃棒、锥形瓶、试管、平板、接种环、制备乳化状态的针筒等。
土壤采集：
在土门菜市场油污重地进行土壤采样。
富集培养基配置：
硫酸铵0.1% 磷酸氢二钾0.1% 七水硫酸镁 0.05% 七水硫酸亚铁0.001% 酵母膏0.5% 橄榄油乳化液12% 氯化钠l% ph自然，115℃灭菌30min
选择培养基平板：
乳化橄榄油 12% 蛋白胨 1% 硫酸铵0.2% 磷酸氢二钾0.1% 磷酸二氢钾0.
3% 七水硫酸亚铁0.1% 维多利亚蓝0.004% 琼脂1.
5% ph=8.0灭菌115℃30min 复筛培养基平板：乳化橄榄油
12% 蛋白胨1% 硫酸铵0.2% 磷酸氢二钾0.1% 磷酸二氢钾0.3% 七水硫酸亚铁0.1% 琼脂1.5% ph=8 115℃灭菌30min
实验方法：
1、取土样2g悬无菌水中，**，在100ml培养基中加入5ml的悬液，30℃ 180r/m 培养3d。
2、取富集液稀释分别涂布于选择培养基平板上，经培养观察菌落周围的蓝色圈，然后挑取
该菌落于富集培养基斜面上。30℃培养箱3d。
3、将初筛得到的菌株在复筛培养基平板划线，然后放于30℃培养箱中3d。
4、挑取单菌落，镜检并纯化，得到纯菌株保存。
5、活力测定：u=(v-v.)/t×50×n。6、u=酶活（微摩尔/min）v=样品耗碱量（ml),v.=空白
耗碱量（ml),50=1ml0.05mol/l氢氧化钠的微摩尔数，t=反应时间（min),n=稀释倍数
脂肪酶的活力的测定：
1、测定方法很多: 酸碱滴定法，电位滴定法，浊度测定法，甘油测定法，色谱分析法等。
2、常用的检测手段为酸碱滴定，在酸碱滴定的方法中，有直接进行滴定的，也有先用疏水
有机溶剂抽提出脂肪酸，再进行滴定的。
活性测定选择时注意：
1、由于反应体系中存在缓冲液的缓冲作用，因此直接滴定法的合理性常令人怀疑，更容易
给科研人员造成困惑，而且直接滴定法的稳定性一般都不十分理想。
2、根据脂肪酸和铜离子形成铜皂的原理利用分光光度法(715nm附近)进行脂肪酶活力的检测，但是由于实验中使用大量苯进行铜皂的萃取，容易造成污染和对人体造成伤害，因此使用该方法的人少。
3、三丁酸甘油醋和三油酸甘油酷作为底物的时候，脂肪酶活力检测的结果比较稳定，但是
由于三丁酸甘油醋和三油酸甘油酷**比较昂贵，因此使用的人很少。
4、辛酸对硝基苯酚酷自水解的速度比较快，因此检测脂肪酶活力的时候，误差比较大;而乙
酸对硝基苯酚醋水解的速度比较缓慢，因此实验误差相对较小，但是辛酸对硝基苯酚醋和乙
酸对硝基苯酚醋都不是脂肪酶的天然底物，一般认为不适合作为脂肪酶活力检测的底物，尤
其用乙酸对硝基苯酚酷作为底物，其检测的活力作为醋酶活力似乎更合理一些。
5、本实验筛选得到的野生菌株产胞外脂肪酶活性较小，采用将传统的直接酸碱滴定法加以
改进的方法来检测脂肪酶活性。
应用：1、中国食品质量报脂肪酶是酶制剂中的一员，在酒类酿造、蔬菜加工、面包生产、乳品生产、油脂加工等中应用广泛，是优良的食品改质剂。
2、该酶能分解各种天然油脂，分解油脂的容易程度为：c18：3＞c18：2＞c18：1＝c16：
0＞c18：0＞c22：0
脂肪酶的活性测定
5楼：天堂狗
方法：⒈粗酶液的制备
用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.
030 g， 用蒸馏水溶解并定容至100 ml， 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.
03%的粗酶液。
⒉实验设计
本实验以10 ml色拉油为底物，以酶用量、水解温度、反应时间为因素，通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。
⒊酸价的测定
酸价是指中和1 mol游离脂肪酸所需naoh的毫克数， 它用于衡量油脂的水解程度。实验中用酸碱滴定法测定水解液的酸价， 参照文献[ 3， 4 ]中所使用的方法， 向所得的水解液滴加1 ml 95%的乙醇溶液， 摇匀， 终止反应， 并加入2滴酚酞指示剂， 迅速用0.05 mol/l的naoh溶液滴定至溶液呈微红色， 在30 s内不消失为终点， 记录消耗的naoh溶液毫升数（v）。
用同样的方法测定空白值， 每个试验重复两次， 以平均值作为测定结果。
酸价按下式计算：
x = c (v - v0) ×40 /m
式中： x —油脂酸价（mgnaoh /g油）
c—naoh标准溶液的浓度（mol/l)
m —试样的质量（g)
40—naoh的mmol质量（mg/mmol)
4 粗脂肪酶活力的测定
在最佳水解条件下， 分别测得粗脂肪酶和标准脂肪酶水解液的酸价x1、x2 ， 根据公式u1 /u= x1 / x2求得粗脂肪酶的活力， 其中u1为粗脂肪酶活力， u为标准脂肪酶活力。
5标准脂肪酶液的配制
根据实验最佳条件， 配制标准脂肪酶液。一篇相关文献 粗脂肪酶活力的测定方法的研究.pdf
答：实验设计，本实验以10 ml色拉油为底物，以酶用量、水解温度、反应时间为因素，通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。用色拉油作底物不太妥，一般是用橄榄油，化学纯的。