配制固体培养基需要加入的琼脂量是多少

2020-12-10 13:03:00 字数 5627 阅读 4541

1楼:迷了路的鹿

固体培养基的配置中,琼脂的比例在15%~20%均可。

琼脂粉一般加15g,以下为lb固体培养基的配置方法lb固体培养基,倒制时培养基温度不宜过高,否则冷却后平板会产生大量冷凝水。

lb(luria-bertani)固体培养基在950ml ddh2o中加入

胰化蛋白胨(tryptone) 10g;

酵母提取物(yesat extract)5g;

nacl 10g。

用1m的naoh调节ph值到7.0,定容至1l。

然后加入15g琼脂粉。

121℃,20min高压灭菌,待冷却至50-60℃时,倒制平板。

倒制时培养基温度不宜过高,否则冷却后平板会产生大量冷凝水。

下列关于配制培养基的叙述,正确的是(  )a.制作固体培养基必须加入琼脂b.加入青霉素可得到放线菌c

2楼:百度用户

a、固体培养基需加入凝固剂,琼脂是常用的,但不是唯一的,a错误.b、青霉素可抑制细菌和放线菌的生长,b错误.c、自生固氮菌能够将空气中的氮还原成氨,故培养基配制时不需加氮源,c正确.

d、发酵工程一般用液体培养基,d错误.

故选:c.

琼脂添加量对接种有何影响?对微生物有何影响?

3楼:北京索莱宝科技****

在微生物实验中,琼脂添加量对接种和对微生物是没有太大影响的:

因为培养基中加琼脂,可以通过添加琼脂作为凝固剂来将液体培养基转化为固体培养基或半固体培养基。(加入琼脂的固体培养基与液体培养基相比优点在于操作简便,通气问题易于解决,便于经常观察研究等。)

琼脂作为凝固剂的优点:由于用琼脂配制的固体培养基清晰透明,便于观察菌丝的形态,故成为常规斜面域平板培养基不可缺少的材料。其用量因使用季节、目的和琼脂本身质量的不同而异。

4楼:缄默喵

琼脂的多少主要会影响培养基的物理状态,固体培养基琼脂含量高,半固体培养基低,液体培养基不加琼脂。如果培养基的物理状态改变肯定需要采取不同的接种方式,固体培养基一般用于分离单菌落,需要划线或用稀释液涂布,液体、半固体培养基用于扩增、获取代谢物等,直接加入种子液即可。

对微生物的影响主要体现于微生物是否喜欢吸附在固体表面生长

配制培养基的流程

5楼:匿名用户

不是啊用灵敏度为0.1mg的天平称取药品.

(2) 往烧杯加入适量蒸馏水或无菌水.

(3) 将药品放入烧杯内,并用玻璃棒搅拌使其溶解,难溶时可适当加温以加速溶解.

(4) 要待一种药品完全溶解后再加入下一种药品.

(5) 所加入的药品应依次加入,直至药品全部加入溶解为止。 例ms母液的配制

按ms培养基成分表,将各种化学物质归成几大类,分别为大量元素、微量元素、铁盐、有机物。 大量元素10倍液(mg/l)微量元素1000倍液(mg/l)有机物100倍液(mg/l)铁盐nh4no3 1,6500

kno3 1,9000

cacl2?2h2o 4,400

mgso4?7h2o 3,700

kh2po4 1,700hbo3 6,200

mnso4?4h2o 22,300

znso4?7h2o 8,600

ki 830

na2moo4?2h2o 250

cuso4?5h2o 25

cocl2?6h2o 25甘氨酸 200

肌醇 10,000

烟酸 50

维生素b6 50

维生素b1 405.57g fes04?7h2o和7.45g na2一edta溶于1升蒸馏水里,用时每配1升ms培养基取5ml。

取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。 2. 培养基制备

配制流程见图1-2,其顺序是:

① 取烧杯或三角瓶注入一定量的蒸馏水,将各种母液按所需容积分别用移液管吸取并混合在一起,然后按要求加入一定量的激素、蔗糖后定容至一定体积。

② 用1mol/l的naoh或hcl调节ph

③ 如制固体培养基,则加入1%左右的琼脂后加热煮沸,使其熔化。

④ 分装,可用漏斗将液状培养基注入培养瓶,注入量视培养瓶容量大小而定,通常为容器的1/5左右。

⑤ 封瓶口。

⑥ 高压蒸汽灭菌。120℃,1.5mpa,消毒15~20min。

注意压力不能太大,时间也不宜过长,否则蔗糖、有机物特别是维生素类物质会在高温下分解,影响培养基的酸碱度,琼脂也会分解,颜色变深且不易凝固。

⑦ 灭菌后的培养基可放入接种室内静置,让其降温后凝固,如需斜面可将其斜放。

6楼:滑艾香雪

牛肉膏和

蛋白胨是培养

微生物、动物

组织细胞的培养

植物建议使用

液体培养基

,方便适时更换

(植物组织培养

用固体培养基

,加琼脂

)在培养液

中加入全素营养(水、碳源、

氮源、无机盐),另外,植物组织培养还要加入

生长素等激素

具体配方

比例还要参照大樱桃的

生长周期、用途来定

配制培养基的原则是什么?

7楼:匿名用户

楼主,您好。 配制培养基的原则

1、选择适宜的营养物质

总体而言,所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源,但由于微生物营养类型复杂,不同微生物对营养物质的需求是不一样的,因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。自养型微生物能从简单的元机物合成自身需要的糖类、脂类、蛋白质、核酸、维生素等复杂的有机物,因此培养自养型微生物的培养基完全可以(或应该)由简单的无机物组成。例如,培养化能自养型的氧化硫硫杆菌(thiobacillus thiooxdans)的培养基组成见表3.

9。在该培养基配制过程中并末专门加入其他碳源物质,而是依靠空气中和溶于水中的co2为氧化硫硫杆菌提供碳源。

就微生物主要类型而言,有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、原生动物、藻类及病毒之分,培养它们所需的培养基各不相同。在实验室中常用牛肉膏蛋白胨培养基(或简称普通肉汤培养基)培养细菌,用高氏i号合成培养基培养放线菌,培养酵母菌一般用麦芽汁培养基,培养霉菌则一般用查氏合成培养基。

2、营养物质浓度及配比合适

培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好,营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需,浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用,例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长,反而起到抑菌或杀菌作用。另外,培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累,其中碳氮比(c/n)的影响较大。严格地讲,碳氮比指培养基中碳元素与氮元素的物质的量比值,有时也指培养基中还原糖与粗蛋白之比。

例如,在利用微生物发酵生产谷氨酸的过程中,培养基碳氮比为4/l时,菌体大量繁殖,谷氨酸积累少;当培养基碳氮比为3/l时,菌体繁殖受到抑制,谷氨酸产量则大量增加。再如,在抗

生素发酵生产过程中,可以通过控制培养基中速效氮(或碳)源与迟效氮(或碳)源之间的比例来控制菌体生长与抗生素的合成协调。

3、控制ph条件

培养基的ph必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适ph条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在ph7~7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在ph4.

5~6范围内生长。值得注意的是,在微生物生长繁殖和代谢过程中,由于营养物质被分解利用和代谢产物的形成与积累,会导致培养基ph发生变化,若不对培养基ph条件进行控制,往往导致微生物生长速度下降或(和)代谢产物产量下降。因此,为了维持培养基ph的相对恒定,通常在培养基中加入ph缓冲剂,常用的缓冲剂是一氢和二氢磷酸盐(如kh2po4 和k2hpo4)组成的混合物。

k2hpo4溶液呈碱性,kh2po4溶液呈酸性,两种物质的等量混合溶液的ph为6.8。当培养基中酸性物质积累导致h+浓度增加时,h+与弱碱性盐结合形成弱酸性化合物,培养基ph不会过度降低;如果培养基中oh-浓度增加,oh-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物,培养基ph也不会过度升高。

但kh2po4 和k2hpo4缓冲系统只能在一定的ph范围(ph6.4~7.2)内起调节作用。

有些微生物,如乳酸菌能大量产酸,上述缓冲系统就难以起到缓冲作用,此时可在培养基中添加难溶的碳酸盐(如caco3)来进行调节,caco3难溶于水,不会使培养基ph过度升高,但它可以不断中和微生物产生的酸,同时释放出co2,将培养基ph控制在一定范围内。

在培养基中还存在一些天然的缓冲系统,如氨基酸、肽、蛋白质都属于两性电解质,也可起到缓冲剂的作用。

4、控制氧化还原电位(redox potential)

不同类型微生物生长对氧化还原电位(f)的要求不一样,一般好氧性微生物在f值为+0.1v以上时可正常生长,一般以+0.3一+0.

4v为宜,厌氧性微生物只能在f值低于+0.1v条件下生长,兼性厌氧微生物在f值为+0.1v以上时进行好氧呼吸,在+0.

1v以下时进行发酵。f值与氧分压和ph有关,也受某些微生物代谢产物的影响。在ph相对稳定的条件下,可通过增加通气量(如振荡培养、搅拌)提高培养基的氧分压,或加入氧化剂,从而增加f值;在培养基中加入抗坏血酸、硫化氢、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等还原性物质可降低f值。

5、原料**的选择

在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分,特别是在发酵工业中,培养基用量很大,利用低成本的原料更体现出其经济价值。例如,在微生物单细胞蛋白的工业生产过程中,常常利用糖蜜(制糖工业中含有蔗糖的废液)、乳清(乳制品工业中含有乳糖的废液)、豆制品工业废液及黑废液(造纸工业中含有戊糖和己糖的亚硫酸纸浆)等都可作为培养基的原料。再如,工业上的甲烷发酵主要利用废水、废渣作原料,而在我国农村,已推广利用人畜粪便及禾草为原料发酵生产甲烷作为燃料。

另外,大量的农副产品或制品,如鼓皮、米糠、玉米浆、酵母浸膏、酒糟、豆饼、花生饼、蛋白胨等都是常用的发酵工业原料。

6、灭菌处理

要获得微生物纯培养,必须避免杂菌污染,因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言,更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌,一般培养基用1.

05kg/cm2,121.3℃条件下维持15~30min可达到灭菌目的。在高压蒸汽灭菌过程中,长时间高温会使某些不耐热物质遭到破坏,如使糖类物质形成氨基糖、焦糖,因此含糖培养基常在0.

56kg/ cm2,112.6℃15~30min进行灭菌,某些对糖类要求较高的培养基,可先将糖进行过滤除菌或间歇灭菌,再与其他已灭菌的成分混合;长时间高温还会引起磷酸盐、碳酸盐与某些阳离子(特别是钙、镁、铁离子)结合形成难溶性复合物而产生沉淀,因此,在配制用于观察和定量测定微生物生长状况的合成培养基时,常需在培养基中加入少量螯合剂,避免培养基中产生沉淀,常用的螯合剂为乙二胺四乙酸(edta)。还可以将含钙、镁、铁等离子的成分与磷酸盐、碳酸盐分别进行灭菌,然后再混合,避免形成沉淀;高压蒸汽灭菌后,培养基ph会发生改变(一般使ph降低),可根据所培养微生物的要求,在培养基灭菌前后加以调整。

在配制培养基过程中,泡沫的存在对灭菌处理极不利,因为泡沫中的空气形成隔热层,使泡沫中微生物难以被杀死。因而有时需要在培养基中加入消泡沫剂以减少泡沫的产生,或适当提高灭。详情请参考国家标准物质网****

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