大家都常用哪些真核表达载体质粒,真核表达载体、腺病毒载体、慢病毒载体在使用上的区别是什么?

2020-11-25 12:17:56 字数 5446 阅读 4794

1楼:匿名用户

这要看载体是否具有原核启动子了。

一般的真核表达载体都是穿梭载体,载体上的氨苄青霉素等抗性基因就是可以再原核生物中表达的。但是你连接在载体上的真核基因是不会在原核生物中表达的,因为基因前边只有载体上的真核启动子,而且可能基因里面也会有内含子。

真核生物有哪些 真核生物有质粒吗

2楼:太岁

真核生物指有核膜包被的成型细胞核的生物,是所有单细胞或多细胞的、其细胞具有细胞核的生物的总称,包括原生生物界、真菌界、植物界和动物界。所有动物、植物、真菌和其他具有由膜包裹着的复杂亚细胞结构的生物都属于真核生物。

质粒一般存在原核生物内,但也有真核生物有。如酵母菌,其质粒存在于细胞质中。

1、目前已普遍认为质粒仅指细菌、酵母和放线菌等生物中染色体以外的单纯dna分子;

2、某些质粒既能独立存在于细胞中,又能整合到染色体上,这种质粒则称为附加体;

3、大部分质粒独立于染色体而复制、转移,并且决定细菌的某些性状,其遗传具有类似细胞质遗传的特征。

真核表达载体、腺病毒载体、慢病毒载体在使用上的区别是什么?

3楼:阿鲁巴星人

真核表达载体包括腺病毒载体和慢病毒载体,在真核细胞内用于表达目的蛋白的载体都可以叫做真核载体。

腺病毒载体携带外源基因较大,可瞬时高表达。

慢病毒载体携带外源基因较小些,但可以重组入细胞基因组,稳定高表达。

真核过表达质粒,原核过表达质粒的区别~急求~~

4楼:學雅思

一、指代不同

1、真核过表达质粒:真核细胞表达载体之一为pegfp-n1载体,具有对方面的优点。pegfp-n1载体上携带有egfp蛋白表达基因。

2、原核过表达质粒:能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行表达的载体。

二、特性不同

1、真核过表达质粒:该质粒具有很强的复制能力,可以满足随宿主细胞**时跟随胞质遗传给新生的子细胞,这是真核细胞表达载体保证目的基因稳定表达的因素之一。

2、原核过表达质粒:启动子是dna链上一段能与rna聚合酶结合并起始rna合成的序列,它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子,基因就不能转录。

由于细菌rna聚合酶不能识别真核基因的启动子,因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。

三、载体构建不同

1、真核过表达质粒:,由238个氨基酸组成,分子量约为27kd。gfpgfp在包括热、极端ph和化学变性剂等苛刻条件下都很稳定,用甲醛固定后会持续发出荧光,但在还原环境下荧光会很快熄灭。

2、原核过表达质粒:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),pcr循环获得所需基因片段。

5楼:匿名用户

所有的质粒都是在细菌(原核)中构建和扩增的,但要在真核细胞中表达需要真核表达载体,要在原核细胞中表达需要原核表达载体。这两种载体主要的区别是启动子和polya加尾信号的不同,一个适合在原核细胞中表达,一个适合在真核细胞中表达。

你需要哪种质粒取决于你最终需要在哪种细胞中表达目的蛋白,如果你要直接在大肠杆菌中表达目的蛋白,然后用纯化的蛋白去处理黑色素瘤细胞,那你就应该用原核载体;如果你要在大肠杆菌中构建质粒,然后把质粒转染到哺乳细胞中表达目的蛋白,你就应该用真核载体。但无论哪种载体,构建和扩增质粒都是在大肠杆菌中进行的。

至于抗性基因,因为所有质粒都要在大肠杆菌中扩增,所以都带有大肠杆菌的某种耐药基因。至于真核耐药基因则不一定,原核表达载体肯定不需要真核耐药基因,真核表达载体则有些有真核耐药基因,有些没有。另外,原核细胞的kana耐药基因和真核细胞的neo耐药基因是同一个基因。

6楼:匿名用户

质粒只是小型环状dna分子,你指的真核、原核具体是什么?

原核表达载体和真核表达载体的区别

7楼:威海博锐化机

一、表达载体不同:

原核表达载体构建重组表达载体:

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶**kit或冻融法**载体大片段。

2、pcr产物双酶切后**,在t4dna连接酶作用下连接入载体。

真核细胞表达载体之一为pegfp-n1载体,具有对方面的优点。pegfp-n1载体上携带有egfp蛋白表达基因。

二、表达实现方式不同:

真核表达载体具有neo基因,可以采用g418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。

三、获得目的基因方式不同:

pegfp-n1载体从结构上看,质粒具有很强的复制能力,可以满足随宿主细胞**时跟随胞质遗传给新生的子细胞,这是真核细胞表达载体保证目的基因稳定表达的因素之一。

原核表达载体获得目的基因:

1、通过pcr方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),pcr循环获得所需基因片段。

2、通过rt-pcr方法:提取总rna,以mrna为模板,逆转录形成cdna第一链,以逆转录产物为模板进行pcr循环获得产物。

8楼:匿名用户

区别主要在表达重组元件还有基因标记。promoter,terminater是宿主识别的的,真核可能还需要enhancer,重组到基因组中的话,需要介导重组的序列。筛选标记绝大多数不一样。

真核表达载体在宿主中以质粒形式存在的,可以复制。哺乳动物细胞里没有质粒,外源基因整合到基因组中的,所以不能扩增。由于整合多个位点而产生多拷贝。

如果说载体的重组,没区别,都是一样的酶切加连接。细菌转化也一样。真核载体在细菌中也可以进行增值。

表达的话,一般原核是直接转化细菌通过ispg诱导进行表达,蛋白表达后的形式一般是通过包涵体或者是分泌型蛋白存在,这种蛋白如果是真核基因**,不一定拥有相应的蛋白生物活性,因为原核表达缺少真核转录后的蛋白修饰机制。但是原核表达的蛋白容易纯化,很容易获得纯化蛋白做为免疫原等进行使用。

而真核表达则是通过脂质体或者是pei的等转染试剂在体外通过和质粒形成复合体, 将质粒导入细胞后进行瞬时表达。称为瞬时表达的原因是因为质粒在真核细胞中不能扩增。并且不断被细胞所降解,这种表达在一定的时间后就会消失。

除非质粒被整合进入细胞的基因组,通过质粒上带的筛选标记,如g418等,通过筛选得到一株稳定表达你的目的蛋白的细胞克隆。但是这种细胞克隆的表达量相比瞬时表达会非常低甚至于检测不到。真核表达的特点是所表达的蛋白一旦表达即拥有相应的生物学活性,因此真核瞬时转染往往用于研究单个基因在细胞中的功能。

而不能用于纯化蛋白。

此外,真核表达还有用于昆虫细胞的杆状病毒表面展示系统,其本质也是通过转染含有目的基因的重组质粒(特殊质粒,专用于杆状病毒表面展示系统)给昆虫细胞,然后使用野生型的杆状病毒或者是人工改造过的杆状病毒来感染相应的细胞,来是病毒和质粒在昆虫细胞体内发生重组,获得目的基因,并且最终表达于病毒子的表面,所以成为表面展示系统。

9楼:匿名用户

原核载体可以将真核基因表达,但是表达出来的蛋白是没有活性的,因为缺少翻译后修饰系统。。。真核的表达载体呢 由于比较大 不适合大量快速扩增,所以要在其载体上构建可以在原核生物 如大肠杆菌中复制的所需的复制原件 。。。。综上 在应用的时候 要构建 穿梭质粒 可以穿梭于 原核和 真核 呵呵 还有就是 原核表达载体的基本元件和真核的有不同的地方 。。。。。

总觉得不够正确答案 。。。。。有些人缘的蛋白在原核里没有蛋白翻译后修饰,表达后没有活性,这时候就得在真核里表......

10楼:匿名用户

主要是因为原核和真核表达系统所需的表达元件不同。

比如说启动子,终止子在两种表达系统中是不一样的。

带有真核表达元件的是真核载体,能在真核生物内表达;

带有原核表达元件的是原核载体,能在原核生物内表达。

两者都具有的为穿梭载体。

1)真核表达载体和原核表达载体就是能在真核生物或原核生物中表达的载体,它们一般都带有能在真核生物或原核生物中表达的必需表达元件;

2)真核表达和原核表达的目的都是为了能够大量获得自己所需要的目的基因的表达产物,最好有生物活性,以便下一步的实验需要.

3)原核表达载体一般只能在原核生物中表达外源基因,但有些穿梭载体可以分别在真核和原核生物中表达它们的表达元件.

原核表达载体质粒有哪些,都有什么特点?真核表达载体质粒有哪些,都有什么特点?谢谢!

11楼:匿名用户

。。。你这问题问的,都够写一套丛书了。。。

真核表达质粒pcdna3.1有哪些性质和特点?

12楼:匿名用户

有用于表达外源基因的cmv启动子,用于筛选的青霉素抗性基因,用于外源基因克隆的多克隆酶切位点mcs,提供转录终止信号的bgh

13楼:乙酰苯胺

http://****zrkx.***/

不知这上面有没有能帮到你的资料。

我才疏学浅,现在还徘徊在原核生物质粒dna的研究中……

慢病毒载体 慢病毒质粒载体 质粒载体 这三个东西是什么关系?

14楼:匿名用户

我不知道如何说明。

按照我的理解,质粒载体是一个很模糊、宽泛的概念。所有的中小型、包含有某些功能性基因序列的、闭合环状双链dna,都可以叫做质粒载体。用于真核细胞的,有真核质粒;用于原核的,有原核质粒。

区别就在于说使用的元件的差异。我们通过质粒这种dna作为载体,来承载我们需要的基因,或是dn**段。它没有很明确的功能方向。

慢病毒载体是一类规定了功能方向的载体,它的构建使用了慢病毒的一些元件,最终的目标是进入动物细胞体内,进行一个稳定的表达。

对于慢病毒质粒载体,我一般是把他跟慢病毒载体混用的。有好心人能告诉我他们的区别不?

15楼:手机用户

按表达载体构建**类型分:

(1)质粒表达载体,以质粒为改建基础的载体,其的主要功能在基因选殖(cloning),选殖的主要目的是分离、纯化及繁殖特定的基因。实验中,大都用大肠杆菌改建质粒作为表达载体。

(2)病毒表达载体,其中包括腺病毒表达载体,逆转录病毒表达载体和慢病毒表达载体。腺病毒是一种线状dna肿瘤病毒,基因组内有14个基因;逆转录病毒,使最常用的一种病毒载体,是由具有感染性的小白鼠的白血病病毒改造而来;慢病毒表达载体是以hiv-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因**载体。

另有列出5级分类的,分为:质粒载体(原核表达载体,真核表达载体),病毒载体(腺病毒表达载体,逆转录病毒表达载体)。

真核表达载体能在大肠杆菌中表达吗

16楼:我们飞哈

这要看载体是否具有原核启动子了。

一般的真核表达载体都是穿梭载体,载体上的氨苄青霉素等抗性基因就是可以再原核生物中表达的。但是你连接在载体上的真核基因是不会在原核生物中表达的,因为基因前边只有载体上的真核启动子,而且可能基因里面也会有内含子。