在配制培养基的操作过程中应该注意些什么问题?为什么

2020-11-25 10:16:56 字数 5344 阅读 8032

1楼:邂逅

1、培养基配方的选定

同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此,除所用的是标准方法,应严格按其规定进行配制外,一般均应尽量收集有关资料,加以比较核对,再依据自己的使用目的,加以选用,记录其**。

2、培养基的制备记录

每次制备培养基均应有记录,包括培养基名称,配方及其**,和各种成份的牌号,最终ph值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等,记录应复制一份,原记录保存备查,复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。

3、培养基成分的称取

培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱,最好一次完成,不要中断。可将配方置于傍侧,每称完一种成分即在配方面军做出记号,并将所需称取的药品一次取齐,置于左侧,每种称取完毕后,即移放于右侧。完全称取完毕后,还应进行一次检查。

4、培养基各成份的混合和溶化

培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅,以防有微量铜或铁混入培养基中,使细菌不易生长。最好使用不锈钢莴加热溶化,可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。

在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用,应重新制备。待大部分固体成分溶化后,再用较小火力使所有成分完全溶化,迄至煮沸。如为琼脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后将两溶液充分混合。

在加热溶化过程中,因蒸发而丢失的水分,最后必须加以补足。

5、培养基ph的初步调正

因培养基在加热消毒过程中、ph会有所变化,培养基各成分完全溶解后,应进行ph的初步调正。例如,牛肉浸液约可降低ph0.2,而肠浸液ph却会有显著的升高。

因此,对这个步骤,操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终ph,保证培养基的质量。ph调整后,还应将培养基煮沸数分钟,以利培养基沉淀物的析出。

6、培养基的过滤澄清

液体培养基必须绝对澄清,琼脂培养基也应透明无显著沉淀,因此 ,须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法,滤纸应折叠成折扇或漏斗形,以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。

琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去,再用滤纸反复过滤。

如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。即将冷却至55~60°c的培养基放入大的三角烧瓶内,装入量不得超过烧瓶容量的1/2,每1000ml培养基加入1~2个鸡蛋的蛋白,强力振摇3~5分钟,置高压蒸汽灭菌器中、121°c加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。

7、培养基的分装

培养基的分装,应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵,其外还须用防水纸包扎(现试管一般多有用螺旋盖者)。

分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时,分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒,以利于培养基的彻底灭菌。

每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中,随该批培养基同时灭菌,以为测定该批培养基最终ph之用。

8、培养基的灭菌

一般培养基可采用121°c高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中,如无特殊规定,即可用此法灭菌。

某些畏热成分,如糖类,应另行配成20%或更高的浓液,以过滤或间歇灭菌法消毒,以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应以无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50°c左右的培养基中。

琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出,冷至55℃-60℃时,摆置成适当斜面,待其自然凝固。

9、培养基的质量测试

每批培养基制备好以后,应仔细检查一遍,如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终ph。

将全部培养基放入36±1°c恒温箱培养过夜,如发现有菌生长,即弃去。

用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基,培养24~48小时,如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次,如结果仍同前,则该批培养基即应弃去,不能使用。

10、培养基的保存

培养基应存放于冷暗处,最好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周,倾注的平板培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。

配制培养基过程中应该注意什么问题?

2楼:t信念

配置培养基需要:

1、 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。

2、 注意各种营养物质的浓度及合适配比,保持合适渗透压 。

3、 将培养基的 ph 控制在适宜的范围之内,以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。

4、要注意各种原料的配比,每种培养基的配比合适的配比,可以按照老师的要求去做。

5、如需要加热的时候注意时间的把握。

3楼:匿名用户

在制备培养基时,通常要考虑以下因素:

(1)ph值多数细胞系在ph=7.4下生长得很好。尽管各细胞株之间细胞生长最佳ph值变化很小,但一些正常的成纤维细胞系以ph=7.

4~7.7最 好,转化细胞以ph=7.0~7.

4更合适。据报道,上皮细胞以ph=5.5合适。

为确定最佳ph值,最好做一个简单的生长实验或特殊功能分析。

酚红常用作指示剂,ph=7.4呈红色,ph=7.0变橙色,ph=6.

5变黄色,而ph=7.6呈红色中略带蓝色,ph=7.8呈紫色。

由于对颜色的观 察有很大的主观性,因而必须用无菌平衡盐溶液和同样浓度的酚红配一套标准样,放在与制备培养基相同的瓶子中。

(2)缓冲能力碳酸盐缓冲系统由于毒性小、成本低、对培养物有营养作用,因此比其他缓冲系统用得多。在生理ph值条件下的缓冲能力差。

(3)渗透压多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围,一般常用冰点降低或蒸汽压升高测定。如果自己配培养基,可通过测定渗透压防止称量和稀释等造成的误 差。

(4)粘度培养基的粘度主要受血清含量的影响,在多数情况下,对细胞生长没有什么影响。在搅拌条件下,用羧 甲基纤维素增加培养基的粘度,可减轻细胞损害。这对在低血清浓度或无血清下条件下培养细胞显得尤为重要。

4楼:陈芙苍西

根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。

注意各种营养物质的浓度及合适配比,保持合适渗透压。

将培养基的

ph控制在适宜的范围之内,以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。

要注意各种原料的配比,每种培养基的配比合适的配比,可以按照老师的要求去做。

如需要加热的时候注意时间的把握。

培养基(medium)是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。

问题一:在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么?

5楼:匿名用户

一、关于培养基配制

1、当然是注意浓度配比不要搞错

2、很多培养基的加料顺序有讲究,否则会有沉淀产生3、有些培养基会有不溶物质,分装前应摇匀

4、不要忘了调节ph值(一般细菌都需要,酵母可能自然ph就行,不过不一定)

5、加热溶解时尽量不要煮沸,会损失营养物质二、关于微量元素:要看是什么微量元素

1、如果是抗生素、维生素等不耐热物质,应该先过滤除菌,再加入灭好菌的培养基中。

2、如果是金属离子等耐热眼泪,可以配制成母液,配制培养基时加入适量即可同时灭菌。

三、关于浓度配比:既然需要配制培养基,就说明已经到了实验室阶段1、为了可重复性。总不能今天是这样,明天又那样吧。

2、有适合不适合。

3、为了得到最好的培养效果。

配制培养基过程中应该注意什么问题

6楼:t信念

配置培养基需要:

1、 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。

2、 注意各种营养物质的浓度及合适配比,保持合适渗透压 。

3、 将培养基的 ph 控制在适宜的范围之内,以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。

4、要注意各种原料的配比,每种培养基的配比合适的配比,可以按照老师的要求去做。

5、如需要加热的时候注意时间的把握。

7楼:paint温水寒刀

刚刚复习了这里,借花献佛~~

培养基配制应遵循的原则

1、 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。

2、 注意各种营养物质的浓度及合适配比,保持合适渗透压 。

3、 将培养基的 ph 控制在适宜的范围之内,以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。

4、 经济节约的原则。在所选培养基成分能满足微生物培养要求的前提下,尽可能选用**低廉,资源丰富的材料作培养基成分。

5、控制氧化还原电位。对厌氧的微生物尤其重要。

6、培养基应无菌。故在培养基配制后应彻底杀死培养基中的杂菌 。

8楼:天子欧阳工作室

配置过程中最值得注意的就是不能再配置过程中引入了可影响培养物生长的物质,比如配置细菌培养基就不能使用铁的容器。此外,配置好后注意保存以免受到污染。

9楼:abc高分高能

制备培养基中有哪些需要注意的点呢

在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么

10楼:哈灵培养基厂家

一、关于培养基配制

1、当然是注意浓度配比不要搞错

2、很多培养基的加料顺序有讲究,否则会有沉淀产生3、有些培养基会有不溶物质,分装前应摇匀

4、不要忘了调节ph值(一般细菌都需要,酵母可能自然ph就行,不过不一定)

5、加热溶解时尽量不要煮沸,会损失营养物质二、关于微量元素:要看是什么微量元素

1、如果是抗生素、维生素等不耐热物质,应该先过滤除菌,再加入灭好菌的培养基中.

2、如果是金属离子等耐热眼泪,可以配制成母液,配制培养基时加入适量即可同时灭菌.

三、关于浓度配比:既然需要配制培养基,就说明已经到了实验室阶段1、为了可重复性.总不能今天是这样,明天又那样吧.

2、有适合不适合.

3、为了得到最好的培养效果.

在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题 为什么

11楼:雪原小马

培养基配制过程中常见问题如下:

首先,在培养基的配制过程中,首先要看培养基成分,看是否有特殊物质的加入,以及成分之间是否有先后顺序,或者是一些抗生素的加入与否。

其次,培养基成分有相互作用的,要先配制母液,再分批加入。有抗生素的,要看抗生素类型,譬如氯霉素的加入,要事先灭菌好一次性过滤器。如果有放线菌酮类的加入,特别要做好个人防护,不可以用手直接接触。

再者,要看是否有蛋白胨类的物质加入,这些在煮培养基过程中,一定要不停的搅拌,要不然会突然暴沸,大量泡沫涌出白瓷钢。