原生质体的分离时为什么要在酶液中加甘露醇

2020-11-24 17:58:55 字数 3437 阅读 2780

1楼:匿名用户

原生质体没有细胞壁,对渗透压敏感,外界必须保持高渗才能保证它不破裂,

我的理解就是防止细胞因外界浓度低会吸水胀破,加高渗的甘露醇就能减小内外浓度差。

原生质体培养液中需要加入适宜的甘露醇以保持一定的渗透压,其作用是

2楼:匿名用户

具体作用是提高渗透压,防止水分渗入细胞内部,造成细胞破裂。

甘露醇是山梨糖醇的同分异构体,两种醇类物质的二号碳原子上羟基朝向不同,分子式是c6h14o6,分子量为182.17。易溶于水,为白色透明的固体,有类似蔗糖的甜味。

甘露醇虽可被人的胃肠所吸收,但在体内并不蓄积。被吸收后,一部分在体内被代谢,另一部分从尿中排出;

甘露醇因溶解时吸热,有甜味,对口腔有舒服感,故更广泛用于醒酒药、口中清凉剂等咀嚼片的制造,其颗粒型专作直接压片的赋形剂。

3楼:匿名用户

作用是维持渗透压,防止原生质体破裂。因为甘露醇对于原生质体没有毒害作用,其他物质虽也可以维持渗透压,但有一定毒害作用。

4楼:匿名用户

有维持细胞形态、储存养料、调节细胞渗透吸水的作用。

甘露醇:是一种己六醇,因溶解时吸热,有甜味,对口腔有舒服感,故更广泛用于醒酒药、口中清凉剂等咀嚼片的制造,其颗粒型专作直接压片的赋形剂。甘露醇是一种高渗性的组织脱水剂,临床上广泛应用于**脑水肿,预防急性肾衰,**青光眼,加速毒物及药物从肾脏的排泄。

在获得原生质体过程中,加入甘露醇的目的是什么

5楼:手机用户

甘露醇是作为维持细胞膜内外渗透压平衡的稳定剂使用的。其具体作用是提高渗透压,防止水分渗入细胞内部,造成细胞破裂。

下面是烟草叶片原生质体分离和培养的流程图:请回答:(1)酶解时,在纤维素酶和果胶酶的混合液中,还需

6楼:二管家

(1)在获得植物原生质体时,需在0.5~0.6mol/l的甘露醇溶液环境(较高渗透压)下用纤维素酶和果胶酶混合液处理实验材料,将细胞壁消化除去,获得球形的原生质体.

(2)获得原生质体后可用红墨水染色法检测,因为生活状态的原生质体细胞膜具有选择透过性,原生质体不会被染上颜色,但如果原生质体死亡,由膜的选择透过性丧失,原生质体会被染成红色;对原生质体进行显微计数,必须将原生质体制成的悬浮液滴加在血细胞计数板上;可用质壁分离实验来检测原生质体是否已经形成细胞壁.

(3)要将原生质体培养成愈伤组织,配置培养基时需要注意营养物质的适当配比和植物生长调节剂的适当配比.

故答案为:

(1)甘露醇

(2)红墨水染色 血细胞计数板 质壁分离(3)营养物质的适当配比和植物生长调节剂的适当配比

原生质体分离

7楼:

原生质分离:酶(纤维素酶,离析酶)

步骤:叶片表面消毒→去除表皮→叶碎片漂浮在含有酶和渗透压稳定剂的溶液中→培育→原生质体沉到培养皿底部→除去酶溶液→将原生质体移入cpw清洗→离心→清洗基质两次→重悬浮于培养基→除去小的个体,用血球计计数→调整到合适的密度重悬浮于培养基。

原生质体的培养:

培养基:ms+naa 2.0ppm+ba 0.5ppm+3%蔗糖+9%甘露醇

注意:1、原生质体分离后,非常脆弱,需要渗透压保护剂的保护直到细胞壁形成。

2、针对不同的研究对象,培养基中生长素和细胞**素的水平要做适当调整。

影响原生质体培养的因素:营养需求(nh4+不能过多),渗压剂,培养密度(105/ml),

贮藏条件(通常在黑暗处)。

培养方法:液体基质培养法,半液体基质培养法,固体基质培养法,看护培养。

固体培养的步骤:原生质体移入培养基→1体积含原生质体的培养基与1体积含琼脂糖(40℃)的培养基混和→倒转培养皿在25℃下培养→原生质体重新产生细胞壁并**成细

胞团→细胞团于琼脂糖基质中传代培养,培养基中应减少渗压剂以利于愈伤组织的形成→诱导分化成植物的根,茎。

原生质体分离培养的意义:1、除去了细胞壁为植物细胞之间的融合扫平了障碍,同时叶为制造新杂种开辟了道路。2、原生质体可摄入外源dna,细胞器、细菌或病毒颗粒,这些特性与植物全能性相结合为高等植物的遗传饰变打下基础。

3、获得细胞无性系和选育突变体的优良起始材料。

8楼:匿名用户

植物细胞的细胞壁主要成分是纤维素,用果胶酶和纤维素酶处理。

细菌的细胞壁主要成分是肽聚糖,用肽酶和对应的多糖酶处理。

去除细胞壁后剩下的就是原生质体了

如何提高拟南芥原生质体转化的效率

9楼:

拟南芥作为模式植物在生物学研究中有着十分重要的作用和极大的优势。本文以columbia野生型拟南芥为材料,用酶解法对拟南芥叶肉进行原生质体分离,用peg介导的转化法将外源基因转化到原生质体中进行瞬时表达。文章着重分析了影响拟南芥叶肉原生质体分离和转化的因素,最终确定了原生质体的最优分离条件,建立了以拟南芥叶肉原生质体为基础的瞬时表达体系。

主要实验结果如下: 1.拟南芥叶肉原生质体分离的最优酶液组成及浓度。

用纤维素酶r-10、半纤维素酶、果胶酶、离析酶r-10、崩溃酶的不同酶类组合对拟南芥叶肉进行原生质体分离,结果发现,在cpw盐溶液中附加1.5%纤维素酶r-10及0.5%离析酶r-10时,分离效率最高,原生质体个数达到9.

55×10~6/gfw,此时细胞碎片数量也最少。 2.最佳酶解条件。

分别对酶解时间、酶液ph等因素进行分析。结果发现,酶ph为6.0,28℃黑暗条件酶解4h时,原生质体产量和活力最高(产量:

11.42×10~6个/gfw,活力:90.

2%)。 3.原生质体稳定性与活力测定。

选择甘露醇做为渗透压调节剂使原生质体细胞保持完态,用fda染色法检测原生质体活力。结果发现,拟南芥叶肉原生质体在0.4m甘露醇的渗透压环境中可以保持完态,此时破碎的细胞最少,原生质体活力最高,达到90.

1%。 4.瞬时表达体系的建立。

选择内质网膜内嵌蛋白sip及肌动蛋白相关蛋白arp6进行研究。通过rt-pcr扩增得到sip(720bp)基因及arp6(1200bp)基因,再将它们分别构建到瞬时表达载体pa7-yfp上,用peg法将其转化入拟南芥叶肉原生质体进行表达。分析了peg浓度,质粒dna含量,原生质体个数等因素对转化的影响。

结果发现,转化效率在一定范围内随peg浓度及质粒dna含量的升高而升高,当转化体系中peg浓度为20%,质粒dna含量为20μg,原生质体细胞数为2.5×10~4个时转化效率最高(69.37%)。

10楼:台融封含景

一般我们没做过,你可以去找老师

在获得原生质体时为什么要用较高渗透压的甘露醇

11楼:匿名用户

原生质体没有细胞壁,对渗透压敏感,外界必须保持高渗才能保证它不破裂

至于补充…不懂= =