核酸复性和杂交的区别,简述核酸的变性,复性与分子杂交

2020-11-23 18:41:55 字数 5078 阅读 7961

1楼:匿名用户

从生物化学本质上来说是一样的,都是碱基的互补配对的过程。

但是核酸的复性是同源的,而杂交是异源的。

就是说,复性,是指**相同(来自同一生物体)的两条核酸链,变性之后又结合在一起的过程。pcr的过程就可以说有复性的过程。

杂交,相互结合的两条链是异源的,可能一条来自生物体,另一条来自人工合成,可能一条是dna,一条是rna。来自同种生物的不同个体也是异源的。这个在基因芯片上是最明显的体现。

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简述核酸的变性,复性与分子杂交

2楼:撸灬自深

....就是高温或者氢氧化钠溶液浸泡使dna分子中的氢键被破坏,俗称变性

复性就比较好理解了,退火使氢键重新形成,使dna分子变为稳定结构分子杂交貌似就是往载体内导入目的gene然后再将载体送进受体细胞,然后让目的gene能够在受体细胞内稳定遗传

然后就是用探针进行目的gene的检测啊什么什么的

3楼:张咲帅

核酸的变性是指受理化因素影响,维持核酸三维结构的碱基堆积力和氢键被破坏,其三维结构改变,理化性质及生物学功能变化的现象。

核酸的复性是指在适宜条件下,热变性后的两条核酸单链可重新缔合恢复双螺旋结构的过程;热变性后的核酸经缓慢冷却的过程又称为退火。

分子杂交是指不完全互补的两条多核苷酸链,依据碱基配对的原则,部分相互结合的现象。

何谓核酸的变性,复性,杂交?各受哪些因素的影响

4楼:

变性,这是dna最重要的一个性质.

①dna双链之间以氢键连接,氢键是一种次级键,能量较低,易受破坏,在某些理化因素作用下,dna分子互补碱基对之间的氢键断裂,使dna双螺旋结构松散,变成单链,即为dna变性.dna变性只涉及二级结构改变,不伴随一级共价键的断裂

“不同核酸链之间的互补部分的复性称为杂交”这句话怎么理解

5楼:匿名用户

就是说,两条非同源的核酸链,通过碱基互补配对结合在一起(复性) 这种现象叫做杂交。

pcr 与核酸分子杂交的原理有 区别吗?

6楼:匿名用户

pcr是技术过程,核酸分子杂交是这一技术的基础原理。pcr技术是建立在这一基础上的。

何为dna的变性,复性和杂交

7楼:匿名用户

变性,这是dna最重要的一个性质。

①dna双链之间以氢键连接,氢键是一种次级键,能量较低,易受破坏,在某些理化因素作用下,dna分子互补碱基对之间的氢键断裂,使dna双螺旋结构松散,变成单链,即为dna变性。dna变性只涉及二级结构改变,不伴随一级共价键的断裂。

②监测dna是否变性的一个最常用的指标是dna在紫外区260nm波长处的吸收光值变化。因为dna变性时,dna双链发生解离,共轭双键更充分暴露,故dna变性,dna在260nm处的吸收光度值增加,并与解链程度有一定的比例关系,这种关系叫做dna的增色效应。

③dna的变性从开始到解链完全,是在一个相当窄的温度内完成的,在这一范围内,紫外光吸收值增加达到最大增加值的50%时的温度叫做dna的解链温度(tm)。一种dna分子的 tm值的大小与其所含碱基中的 g+c的比例相关也与dna分子大小及变性条件有关,g+c的比例越高,dna分子越长,溶液离子强度越高,tm值越大。

④加热、低盐及强酸、强碱均可使dna变性。

复性 变性dna在适当条件下,两条互补链可重新恢复天然的双螺旋构象,这种现象称为复性。热变性的dna经缓慢冷却后即可复性,这一过程也叫退火,一般认为,比tm值低 25℃ 的温度是dna复性的最佳条件。

dna复性的实际应用——杂交

通过变性dna的复性性质,我们可知道,dna单链之间、rna单链之间、一条dna和一条rna链之间只要存在序列互补配对区域,不管是整条链互补,还是部分序列互补,即可重新形成整条双链或部分双链,这即为核酸分子杂交,这在分子生物学研究中有极大的应用,比如:可用于在基因组中对特异基因的定位及检测,pcr技术扩增目的基因等,很多分子生物学实验技术应用的都是核酸分子杂交的原理,如southern blot, northern blot,包括pcr技术等。

核酸杂交

8楼:浙大阿米巴

懒得打字,贴。

核酸杂交方法是一种分子生物学的标准技术,用于检测dna或rna分子的特定序列(靶序列)。经典的核酸杂交方法是将dna或rna先转移并固定到硝酸纤维素或尼龙膜上,与其互补的单链dna或rna探针用放射性或非放射性标记,在膜上杂交时,探针通过氢键与其互补的靶序列结合,洗去未结合的游离探针后,经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针。

经典的核算杂交方法主要包括:dna印迹杂交(southern blot)rna印迹杂交(northern blot)以及斑点杂交和原位杂交:

1、 dna印迹杂交(dna blot hybridization)——有两种核酸印迹法:

将dna或rna溶液直接点样于硝酸纤维素膜或尼龙膜上(斑点或狭线印迹)

经琼脂糖凝胶电泳将片段的dna或rna转移到膜上(southern和northern印迹法)。dna在电泳前先用限制性内切酶消化。

2、 rna印迹杂交(rna blot hybridization):

rna印迹杂交是一种检测已固定在滤膜上的总rna或mrna特定靶序列的技术。

3、 斑点杂交

将少量核酸样品点样在硝酸纤维素滤膜上,80℃烘烤后可牢固地固定在膜上,再用探针进行杂交。尼龙膜,特别是聚偏氟乙烯(pvdf)与dna结合力更高,坚韧、易操作。点样可手工,也可用手工点样品。

检测可用放射性探针自显影或非放射性探针显色。可用于dna或rna分析。

4、 原位杂交

在保持细胞形态条件下,进行细胞内杂交,显影或显色。可用于dna或rna分析。荧光原位杂交(fish)进行染色体dna分析可用于生物学研究的许多领域以及临床细胞遗传学研究。

其主要优点是不仅可以在细胞**的中期,而且可在**间期核中诊断染色体的变化。

广义的核酸杂交就是指非同源的核酸分子间的复性(氢键结合)过程。因此可以说,目前的基因检测技术,除了质普法外都或多或少的涉及了核酸杂交原理。如pcr的引物复性过程、基因芯片的杂交检测过程、基因测序的引物复性过程以及各种snp检测方法等等。

9楼:家love心之所属

将带有标记的探针(如荧光标记)与目的核酸序列,通过碱基互补配对结合在一起,这样就可以确定目的基因的序列。目前主要主要用于检测疾病,如检测体内异常或外源的核酸。

10楼:苍玉兰闪烟

杂交是指不同群体中个体间的交配。杂交的目的是使各亲本的基因配合在一起,造成新的更为有利的基因型,以丰富动物的遗传类型,导致羊群杂合基因型频率增加,纯合基因型频率减少。通过杂交能将不同品种的特性结合在一起,创造出亲本原来所不具备的特性,并能提高后代的生活力。

如果以提高生产性能为目的开展杂交,一般采用级进杂交。即用引进的国外肉羊品种的公羊与当地的母羊进行杂交,杂交公羊淘汰作为肉羊屠宰,优良的杂交母羊留种,继续与国外肉羊进行杂交。这样连续几个世代地进行下去,杂交后代的生产性能越来越接近于父系品种。

如果地方品种已基本满足了生产的需要,但要纠正某个缺点,一般采用引入杂交。即引进少量的外来血液,与当地品种进行一个世代的杂交。在杂交后代中,选择合乎标准的公、母羊留种。

这些种羊再与当地品种的公、母羊进行回交,从中培育优秀的种公羊。通过引入杂交,使当地品种的缺点得到了纠正,又不动摇当地品种的特点。因此,也叫育成杂交。

11楼:公可欣笃书

核酸杂交,是不同的dna分子或dna和rna之间的杂交,不同的核苷酸链之间通过碱基互补配对的原则,组合成新的杂交分子。杂交分子可以是两条脱氧核苷酸链,也可以是一条脱氧核苷酸链和一条核糖核苷酸链。

什么叫核酸杂交?有何应用价值?

12楼:匿名用户

核酸杂交是从核酸分子混合液中检测特定大小的核酸分子的传统方法。其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开,而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双边结构。

杂交通常在一支持膜上进行,因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为dna印迹交(southern blot hybridization )和rna印迹杂交(northern blot hybridization)。其基本过程包括下列几个步骤。

(1)制备样品:首先需要从待检测组织样品提取dna或rna。dna应先用限制性内切酶消化以产生特定长度的片段,然后通过凝胶电泳将消化产物按分子大小进行分离。

一般来说dna分子有其独特的限制性内切酶图谱,所以经酶切消化和电泳分离后可在凝胶上形成特定的区带。再将含有dn**段的凝胶进行变性处理后,直接转印到支持膜上并使其牢固结合。这样等检测片段在凝胶上的位置就直接反映在了转印在膜上。

rna样品则可直接在变性条件下电泳分离,然后转印并交联固定。

(2)制备探针:探针是指一段能和待检测核酸分子依碱基配对原则而结合的核酸片段。它可以是一段dna、rna或合成的寡核苷酸。

在核酸杂交实验中,探针需要被标记上可直接检测的元素或分子。这样,通过检疫与恩印膜上的核酸分子结合上的探针分子,既可知道被检测的核酸片段在膜上的位置,也就是在电泳凝胶上的位置,也就知道了它的分子大小。

(3)杂交:首先要进行预杂交,即用非特异的核酸溶液封闭膜上的非特异性结合位点。由于转印在膜上的核酸分子已经是变性的分子,所以杂交过程中只需变性标记好的探针,再让探针与膜在特定的温度下反应,然后洗去未结合的探针分子即可。

(4)检测:检测的方法依标记探针的方法而异。用放射性同位素标记的探针需要用放射自显影来检测其在膜上的位置;而如果是用生物素等非同位素方法标记的探针则需要用相应的免疫组织化学的方法进行检测。

什么叫核酸的分子杂交

13楼:好意思吗

核酸的分子杂交是定性或定量检测特异rna或dna序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的碱基互补原则而发展起来的。在碱性环境中加热或加入变性剂等条件下,双链dna之间的氢键被破坏(变性),双链解开成两条单链。

这时加入异源的dna或rna(单链)并在一定离子强度和温度下保温(复性),若异源dna或rna之间的某些区域有互补的碱基序列,则在复性时可形成杂交的核酸分子。