荧光定量PCRTm值代表啥意思,荧光染料定量PCR熔解曲线Tm值过高对结果有什么影响

2020-11-22 12:47:40 字数 1614 阅读 5286

1楼:满意请采纳哟

tm值和溶解曲线是为了检测pcr反应特异性的,

主峰前的一个小峰可能是非特异性扩增,

也可能是引物二聚体,可以降低引物浓度试试

荧光染料定量pcr熔解曲线tm值过高对结果有什么影响

2楼:谁说我不好哎

用syber green方法做完pcr后,用来判断产物是否相对专一。反应结束后,逐渐加温。和syber green分子结合的pcr产物

随温度升高逐渐变为单链,就不能在和syber green结合。一般每加温一度,读一次信号。当温度到达pcr产物的tm时,产物解离一下增多。

曲线的横坐标是温度,而纵坐标是荧光信号的变化!开始加热,信号变化不大,所以几乎是平的,接近tm时,突然变化加大,所以出现峰值。再升温,产物全部解离,就又是一条直线了。

如果有非特异性产物,在加热过程中就会出现一些比较矮,宽的峰。

您好,我想问一下荧光定量pcr产物的溶解曲线中tm值在92度左右可以吗?是不是在86-88度之间最好?谢谢

3楼:匿名用户

这个是可以的。根据扩增产物gc含量的不同,tm有可能很高。只要解离曲线有一个很锐的峰,就没有问题。我以前为了提高特异性,专门设计过高tm值的引物。

实时定量pcr的tm值相差多少可以接受

4楼:匿名用户

用2-△△ ct法算的话,应如何算? 假设检测a基因,ct分别为(这里记住ct越大,表明相对含量越低) 普通组/test1:28 实验组1/test2:

29 实验组2/test3:30 这时候要设对照了,假设test1为对照组(普通组),当然是以普通组为对照 那么,相对含量为。

rt-pcr的导出数据的tm值是啥意思

5楼:容易特意

引物tm是设值和合成引物时的tm值, 也就是理论值。

而pcr产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值 引物tm值与pcr产物tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出tm值是多少.在做pcr的时候,将退火温度设定

实时pcr产物的tm值为什么一般是在80以上

6楼:南京金益柏生物科技****

pcr的退火温度是引物与模板之间的,而real time pcr最后的退火温度是产物之间的。产物的tm值,指的是pcr产物解链一半时的温度。一般realtime pcr 的产物大多在70-200bp之间。

当然退火温度会在80以上了。

您好,我想问一下荧光定量pcr产物的溶解曲线的tm值在92度可以吗?是不是在86-88度之间最好?谢谢

7楼:匿名用户

这个不是绝对的,只是大多数rt-pcr产物的tm值会落在那个范围内,有些目的片段很长的产物有可能会稍微大一点。这跟目的片段长度有关系。主要看产物是否为单一峰,是否有杂峰。

8楼:匿名用户

92度时,dna双链都接近变性温度了呀。

tm值常在60~70度左右,可以通过熔接曲线看出来。