为什么检测某种蛋白的表达都用免疫组化和原位杂交l呢

2020-11-22 09:14:15 字数 3336 阅读 9102

1楼:百浩生物

原位杂交是检测基因的,如dna或者rna,不过这个技术有些落后,误差比较大,是比较老的技术了。而免疫组化是进行蛋白定位的,这两种技术可靠性都比较差,但因为操作简单,成本也不太高,在以前是比较常用的,免疫组化只能进行半定量。elisa可以精确定量,但对抗体要求高,临床的试剂盒可信,但科研用的,质量差别太大,成本也很高。

检测表达用western blotting可靠性高一些,因为有分子量大小指标,难以做假。

免疫组化和原位杂交的区别

2楼:北京索莱宝科技****

原位杂交是基

于核酸水平,免疫组化是基于蛋白水平,互不干扰,

免疫组化和原位杂交的区别

3楼:匿名用户

1、定义不同

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原

抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。

原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

2、作用不同

免疫组化:标本,实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理切片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

抗体,免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体,单克隆抗体是一个b淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个b淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。

常用染色方法,根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法最常用。

原位杂交:细胞特异性mrna转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;

感染组织中病毒dna/rna的检测和定位,如eb病毒mrna、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒dna的检测;

癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测;

基因在染色体上的定位;

检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等;

**间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等。

3、意义不同

免疫组化:近年来,随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中,5%-10%的病例单靠h.

e.染色难以作出明确的形态学诊断。

尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可,其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,准确率可达50%-75%。

原位杂交:原位杂交:在研究dna分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。

其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成dna-dna、dna-rna或 rna-rna 双键分子的特点,

应用带有标记的(有放射性同位素,如3h、35s、32p、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质)dna或rn**段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸(rna或dna)片段进行杂交,然后可用放射自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的 mrna或dna 的存在并定位;

用原位杂交技术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性,可进一步从分子水平来**细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

4楼:渊源

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术。

原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

动物实验,western blotting和免疫组化,选择哪个检测蛋白表达?

5楼:炎凌浩

免疫印迹如果结合凝胶成像的话(带相关分析软件),他是可以定量的,但多用来做体外培养的细胞;免疫组化就是针对组织切片的,可以定性、半定量(即看出个大小的关系)。如果你要是做动物实验组织的话,最专业也是最对口的还是做免疫组化。这个两种方法检测出来结果的意义是一样的,都能说明抗癌的具体通路。

做了免疫组化再做原位杂交还有意义吗

6楼:一树冬青人未归

有意义,虽然一般的审稿人对蛋白表达更认组化的数据,因为组化检测的是蛋白,而原位杂交检测的是核酸,但如果做的比较冷门的蛋白,为了证明抗体识别是正确的也做一个原位杂交也没问题,只要探针做好很快就可以出结果。

组织的免疫组化怎么进行统计分析

7楼:杨风游

一般免疫组化都分析实验组和对照组的阳性细胞数有无差异

拍照后用软件如image或肉眼均可以数阳性细胞数,用软件可以规定一个阈值,着色在阈值之上就会被计数;当然用肉眼也要有统一的标准,哪些着色细胞可以计数,哪些不可以计数。

之后使用spss应该就可以分析了

想测试一个基因的mrna表达量,用什么方法最好?如果是原位杂交和免疫组化是不是定量不准?那rt-pcr呢?

8楼:匿名用户

对于基因蛋白表达的定量一般不会用到原位杂交和免疫组化,这两个方法的优点是更加直观,但定量困难,适合用作定性实验。个人认为定量实验检测最好用rt-pcr进行核酸层面的检测,或者用免疫学方法直接检测蛋白量,比如elisa等;蛋白电泳(包括2d)可以进行半定量的实验。另外定量实验要注意的是选择合适的内参,电泳要注意平衡好上样量。

9楼:匿名用户

rt-pcr可以半定量测mrna表达量,想更精确一些,可以用real-time pcr。

全自动免疫组化和原位杂交染色系统属于什么分类

10楼:匿名用户

原位杂交是基于核酸水平

,免疫组化是基于蛋白水平,互不干扰,

如果没有好的抗体,原位杂交不失一种选择,但对某些实验室来说,老板可能还考虑到成本,特别是比较大量的样品的表达的时候,用传统的原位杂交比免疫组化来得便宜。另外,如果你研究的是mirna之类的话,免疫组化是无能为力,你只能用原位杂交看定位了。