rt-pcr里的ct值到底代表什么意思

2020-11-22 09:08:47 字数 2272 阅读 9632

1楼:北京索莱宝科技****

阈值指指数增长期荧光信号的临界值,一般pcr仪会自动给出阈值,而ct指就是扩增曲线达到阈值时的循环圈数。

rt-pcr里的ct值到底代表什么意思?

2楼:匿名用户

rt-pcr是将rna的反转录(rt)和cdna的聚合酶链式扩增(pcr)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从rna合成 cdna,再以cdna为模板,扩增合成目的片段。rt-pcr技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中rna病毒的含量和直接克隆 特定基因的cdna序列。

作为模板的rna可以是总rna、mrna或体外转录的rna产物。无论使用何种rna,关键是确保rna中无rna酶和基因组 dna的污染。使用天为时代公司的总rna提取系统(如目录号 dp405和dp406),所获得的rna的纯度高,基因组dna污染少,用于rt-pcr系统可得到满意结果。

用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、oligo dt 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mrna,三种都可。

rt-pcr引物的选择

随机引物:适用于长的或具有发卡结构的rna。适用于rrna、mrna、trna 等所有rna的反转录反应。主要用于单一模板的rt-pcr反应。

oligo dt :适用于具有polya尾巴的rna。(原核生物的rna、真核生物的 oligo dt rrna和trna不具有polya尾巴。

)由于oligo dt要结合到polya 尾巴上,所以对rna样品的质量要求较高,即使有少量降解也 会使全长cdna合成量大大减少。

基因特异性引物: 与模板序列互补的引物,适用于目的序列已知的情况。天为时 性引物 代公司的superscript one-step system特别适合于与基因特异性 引物连用。

rt-pcr影响因素

rt-pcr反应受多个因素影响,如硫酸镁的浓度, 引物退火的温度,扩增的循环数等。

◇建议选择0.5-3.0 mm (相差0.5 mm)的硫酸镁作初步实验。

◇对于具有较高tm的引物,增加退火和延伸时的温度对反应有利。较高的温度有利于减少非特异的引物结合,因而提高特异产物的得率。

◇大多数目标rna经40轮pcr反应就能观察到。但如果目标rna太稀少,或者只有很少的起始材料,有必要增加扩增的次数到45-50次。

rt-pcr中没有溶解曲线的原因是什么?(ct值有的)

3楼:匿名用户

溶解曲线的意思是:当温度高于扩增产物的tm值时,双链产物变单链,荧光值因为这样的变化而产生变化,根据这一原理,你推算你的体系是是否会在温度变化时产生荧光值的变化,比如你用的是taqman探针,taqman探针产生荧光变化的原理是探针被外切酶活性的taq酶剪切断而产生的,那么在只有温度变化的情况下,是没有荧光值变化的,自然就没有溶解曲线了。但是假如你用的分子信标探针或者sybgreen燃料,情况就不同了。

rt-pcr里的ct值到底代表什么意思

4楼:北京索莱宝科技****

阈值指指数增长期荧光信号的临界值,一般pcr仪会自动给出阈值,而ct指就是扩增曲线达到阈值时的循环圈数。

rt-pcr,做的是bdnf的mrna表达,什么代表它的表达值?是△△ct还是2(-δδct)次方? 30

5楼:匿名用户

你说的表达值应该是相对的表达值还是绝对表达值?既然说到表达值应该是表达量的值,那么就应该是2(-δδct)次方。

6楼:匿名用户

2(-δδct)代表和对照相比的相对表达量,

荧光pcr扩增的ct值是什么意思

7楼:北京索莱宝科技****

荧光定量pcr技术中,有一个很重要的概念 —— ct值。c代表cycle,t代表threshold,ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数

rt-pcr---ct值在25-27之间,内参在19-22之间,可以吗?理想的ct值是多少?

8楼:匿名用户

ct值没有问题。扩曾效率要有相对的标准曲线(等比稀释样本)才能算

pcr的ct值越高说明什么,越低说明什么

9楼:匿名用户

定量pcr吗?

ct值越高,说明模板的起始含量越低。反之,起始含量越高。

注意:是‘反向’的。

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