请教做过免疫共沉淀的高手们谈谈该方法和用途

2020-11-21 21:26:53 字数 2163 阅读 2573

1楼:南大飞秒

飞秒检测发现免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。

当用预先固化在argarose beads上的蛋白质a的抗体免疫沉淀a蛋白,那么与a蛋白在体内结合的蛋白质b也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对b蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。

这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

免疫沉淀实验的操作步骤比较多,同时由于在非变性条件下进行实验,所以要得到一个完美的实验结果,不仅需要高质量的抗体,同时对免疫沉淀体系也需要有严格的控制指标。免疫沉淀实验从:蛋白样品处理;抗体-agarose beads孵育;抗体-agarose beads复合物洗涤到最后的鉴定,每步都非常关键,需要严格控制实验流程中每个关键步骤的质量,才能最终达到你的实验目的。

其优点为:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为:

(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用; (3)必须在实验前**目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若**不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。

请教:免疫共沉淀

2楼:不能给狗狗

染色体免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,chip)是基于体内分析发展起来的方法,也称结合位点分析法,在过去十年已经成为表观遗传信息研究的主要方法。这项技术帮助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰。chip不仅可以检测体内反式因子与dna的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。

近年来,这种技术得到不断的发展和完善。采用结合微阵列技术在染色体基因表达调控区域检查染色体活性,是深入分析癌症、心血管疾病以及**神经系统紊乱等疾病的主要代谢通路的一种非常有效的工具。

免疫沉淀和免疫共沉淀在实验方法上具体有什么区别

3楼:搞一搞好

(1)收获细胞,加入适量细胞ip裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上或者4℃裂解30min, 12,000g离心30 min后取上清;(2) 取少量裂解液以备western blot分析,剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50 μl protein a/g-beads加入到细胞裂解液,4°c缓慢摇。

请教一下搬网的制作方法请知道的高手们进来一下(急)

4楼:匿名用户

网鱼的去卖网那边问吧,钓鱼的人最恨电工 网工 药师了。

5楼:匿名用户

你自己不会制,教你制好了,你也不会玩!容易坏。

6楼:匿名用户

钓鱼人最讨厌的是【电工,网工,药师】请楼主注意了

7楼:匿名用户

网鱼的最讨厌钓鱼的了!搞得好像河是钓鱼的承包是的!

电脑突然显示“c:\windows\system32\881.dll加载错误,但不影响正常工作请教高手们有什么方法处理它?

8楼:匿名用户

点 开始→运行→输入 regedit 后回车进入注册表编辑器【记得新窗口中鼠标点到左上角的"我的电脑"上,以保证全盘搜索】然后点击左上角的 "编辑"→查找→输入 881.dll 后开始查找找到后就将它删除,有多少删多少

最后重起机器即可.

这是软件删除不完全或是杀毒遗留,删了不影响电脑.

如果按我这方法都没有找到,

就下个 【超级兔子】 清理一下。

9楼:匿名用户

中毒咯!正常系统里面没有881.dll这个文件的,病毒想要加载,但是被杀毒软件灭了...

可能的情况的一种

10楼:匿名用户

打开regedit 查找881.dll,找的项目全删除,重新启动电脑就ok.